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        生物通首頁 > 今日動態 > 專題總匯 > 核酸檢測的一場革命,可替代PCR的犀利技術


               自PCR技術誕生以來已經有三十年了。從經典PCR、實時定量PCR再到現在的數字PCR,這一技術在不斷蛻變卻從未淡出我們的視野。重組酶聚合酶擴增RPA,被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術。以此為基礎的TwistAmp® 核酸擴增產品,能夠在15分鐘內進行常溫下的單分子核酸檢測。

        核酸檢測的一場革命,可替代PCR的犀利技術




              什么是RPA技術


        RPA技術主要依賴于三種酶:能結合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,最佳反應溫度在37°C左右。

        重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成,對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結合,防止進一步替換。在這個體系中,由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非常快,一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物。

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        RPA檢測不僅速度快而且靈敏度很高,能夠將痕量的核酸模板擴增到可以檢出的水平。RPA既可以擴增DNA也可以擴增RNA,還省去了額外的cDNA合成步驟。你不僅可以對擴增產物進行終點檢測,還可以對擴增過程進行實時監控,甚至能通過試紙條(側流層析試紙條LFD)讀取結果。



              RPA技術的實戰攻略


        PCR替代技術,RPA全攻略之疑難解答
        了解了RPA技術的原理和特色,現在你一定對這個技術產生了不少疑問。

        PCR替代技術,RPA全攻略之引物設計
        RPA的擴增引物可以說是整個反應的關鍵所在,那么怎樣才能設計好RPA引物呢?

        PCR替代技術,RPA引物與探針的常見問題
        在RPA擴增的基礎體系中添入不同的酶和探針,可以實現多樣化的RPA應用。



              RPA技術的應用


        RPA在HIV檢測中大顯身手
        PCR是嬰兒HIV診斷的金標方法,但許多地區并不具備這樣的條件,而RPA技術正好可以大展身手。

        RPA在癌癥研究中的應用
        RPA不僅可以實現癌癥突變的快速檢測,還能用于抗癌藥物的快速篩選。

        RPA檢測埃博拉等致命病毒
        研究者們在RPA技術的基礎上,開發了檢測多種致命病毒的快速方案。

        RPA成為致病菌檢測的得力工具
        在臨床診斷和食品安全領域,RPA技術可以對常見致病菌進行快速檢測。

        農科院專家用RPA快速檢測轉基因作物
        要更好的管理轉基因作物,就需要快速而簡便的檢測方法

        RPA技術試水二代測序的文庫制備
        未來,經過優化的RPA技術將有望用于二代測序的樣本制備。





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