生物通報道：重組酶聚合酶擴增RPA被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術。RPA擴增的速度非常快，靈敏度高，對硬件設備要求低，而且不需要復雜的樣本處理。這樣的技術特別適合于體外診斷、獸醫、食品安全、生物防御、農業等領域。

在HIV診治中，即時檢測是非常重要的，對嬰兒來說更是如此。有案例顯示，HIV感染后立刻進行治療就能控制住患者體內的病毒，讓它們無法進行復制。舉例來說，生來就攜帶HIV的密西西比嬰兒，在出生后立即得到了治療。后來這個孩子停藥了兩年多，病毒復制依然得到了控制。

目前嬰兒HIV診斷的金標方法是DNA PCR，但許多地區并不具備這樣的條件。在這種條件下，RPA技術正好可以大展身手。（延伸閱讀：核酸檢測的一場革命，可替代PCR的犀利技術）

紙做的HIV DNA檢測裝置

2012年九月，研究人員開發了一個由紙、玻璃纖維和塑料制成的裝置，用來對HIV的DNA進行RPA擴增。這個裝置成本低、小巧輕便、而且易于使用，只需五步就能搞定HIV檢測。擴增結果可以通過側流層析試紙來讀取。

人們可以先從嬰兒的干血斑樣本中提取DNA，然后再進行RPA擴增。研究顯示，用這個裝置進行RPA擴增反應，能在十五分鐘內將10拷貝的HIV DNA擴增到可檢出的水平。可見，這是一個前景廣闊的低成本即時檢測裝置。（文獻：A paper & plastic device to perform recombinase polymerase amplification of HIV DNA, Lab on a Chip）

RPA檢測HIV DNA的實戰效果

如果不能及時檢測嬰兒體內的HIV-1，就會延誤治療并影響治療效果。2013年的一項研究設計了靶標HIV-1基因組不同區域（長末端重復LTR和pol）的兩種探針。研究人員用這兩個探針分別進行RPA擴增，然后進行熒光檢測和側流層析試紙檢測。研究表明，這樣的方法能夠可靠地檢測到3拷貝的前病毒DNA。研究人員在此基礎上測試了多個HIV-1突變株，pol和LTR引物的擴增率分別為98.6%和93%。

這是一個能檢測出HIV-1所有主要亞型的等溫擴增法，能夠在資源匱乏的地區幫助人們診斷攜帶被HIV感染的嬰兒。（文獻：Rapid detection of HIV-1 proviral DNA for early infant diagnosis using recombinase polymerase amplification, MBio.）

HIV DNA的實時定量檢測

今年五月，研究人員使用內參和標準曲線，通過RPA擴增定量了HIV-1 DNA的濃度。這是一種基于實時熒光數據的定量RPA技術，被稱為qRPA。

這項研究通過一系列試驗，分析和定量了不同濃度的HIV-1 DNA樣本。研究顯示，在所有測試的濃度范圍內，qRPA的預測值與正確值在一個數量級以內。可見，定量RPA（TwistAmp exo）可以作為核酸定量的有力工具，用于即時檢測和體外診斷。（文獻：Quantification of HIV-1 DNA using Real-Time Recombinase Polymerase Amplification, Analytical Chemistry）

不插電的HIV DNA檢測

絕大多數核酸擴增（包括等溫擴增）都需要電。但在資源匱乏的區域，最好是有不需要持續供電的診斷工具。RPA的工作溫度在25-43°C之間，不需要嚴格控制孵育溫度，就能達到理想的性能。

今年九月的一項研究顯示，當室溫在31°C - 43°C之間時，孵育20分鐘RPA反應就能成功進行，檢測到10拷貝的HIV-1前病毒DNA。

當室溫降到30°C以下時，RPA的擴增性能有所下降。為此，研究人員開發了一個簡單的化學加熱器，在室溫10-30°C時孵育HIV-1 RPA反應。研究顯示，RPA的性能通過加熱孵育得到了恢復，能檢測到10拷貝的HIV-1前病毒DNA。

研究人員在15°C、20°C、25°C和30°C，用這種加熱器進行了12個RPA反應，結果全部擴增成功。他們還發現，當溫度較低時，孵育30分鐘能促進RPA的擴增性能。研究表明，對RPA HIV-1反應進行化學加熱，與電力設備效果差不多。這也說明，RPA HIV-1檢測不需要多好的設備，就可以實現高靈敏度的診斷。（參考文獻：Non-Instrumented Incubation of a RPA Assay for the Rapid & Sensitive Detection of Proviral HIV-1 DNA. PLoS One）

生物通編輯：葉予