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Nature Methods:抗體質(zhì)量的金標(biāo)
【字體: 大 中 小 】 時(shí)間:2015年07月30日 來(lái)源:生物通
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幾乎所有實(shí)驗(yàn)室都會(huì)用到抗體,抗體不僅是生命科學(xué)研究的重要工具,在免疫學(xué)診斷領(lǐng)域也是不可或缺的。市面上的抗體種類(lèi)繁多同時(shí)也良莠不齊,由于缺乏評(píng)估抗體質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)方法,人們過(guò)去只能依賴(lài)于生產(chǎn)廠家的信用。
生物通報(bào)道:幾乎所有實(shí)驗(yàn)室都會(huì)用到抗體,抗體不僅是生命科學(xué)研究的重要工具,在免疫學(xué)診斷領(lǐng)域也是不可或缺的。市面上的抗體種類(lèi)繁多同時(shí)也良莠不齊,由于缺乏評(píng)估抗體質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)方法,人們過(guò)去只能依賴(lài)于生產(chǎn)廠家的信用。
做過(guò)免疫熒光、免疫沉淀(IP)或者Western blot實(shí)驗(yàn)的人都知道,抗體優(yōu)劣對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有很大的影響。我們買(mǎi)到的抗體往往附有一份檢驗(yàn)報(bào)告和一張western blot圖,除此之外并沒(méi)有什么額外的信息。而且某個(gè)實(shí)驗(yàn)室用得好好的抗體,在別處可能并不好用。
魚(yú)龍混雜的抗體為生物學(xué)研究帶來(lái)了許多不確定因素。為此,科學(xué)家們建立了一個(gè)評(píng)估抗體質(zhì)量的通用標(biāo)準(zhǔn)。這項(xiàng)工作由六個(gè)研究團(tuán)隊(duì)共同完成,相關(guān)論文發(fā)表在近日的Nature Methods雜志上。
“過(guò)去人們難以判斷一個(gè)抗體是否正常工作,因?yàn)檫@類(lèi)實(shí)驗(yàn)往往耗時(shí)長(zhǎng)而且成本高,”多倫多大學(xué)的Aled Edwards說(shuō)。“我認(rèn)為,缺乏抗體驗(yàn)證是一個(gè)嚴(yán)重的科研問(wèn)題!保ㄑ由扉喿x:專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn)談:抗體制備法的利與弊)
研究人員為人們提供了一個(gè)以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟。他們通過(guò)這一方法評(píng)估了免疫沉淀抗體的質(zhì)量,在1124個(gè)重組抗體中鑒定出了“IP金標(biāo)抗體”。隨后,一些“金標(biāo)抗體”、表現(xiàn)沒(méi)有那么好的“不確定抗體”和不起作用的抗體被送往其它研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)行驗(yàn)證。
絕大多數(shù)金標(biāo)抗體在其它團(tuán)隊(duì)手中也表現(xiàn)出了很高的性能,有著很好的可重復(fù)性。研究人員還通過(guò)免疫熒光、Western blot和染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)對(duì)這些抗體進(jìn)行了測(cè)試。總的來(lái)說(shuō),IP金標(biāo)抗體在免疫熒光和ChIP中也很好用,不過(guò)并不一定適合Western blot。研究人員指出,這是因?yàn)檫@些抗體選擇性結(jié)合折疊的蛋白。
“IP-MS能夠給出定量的結(jié)果,”Edwards指出,人們可以利用這些定量數(shù)據(jù),建立一個(gè)抗體質(zhì)量的公共平臺(tái),幫助科學(xué)家們找到最符合自己需要的抗體。
生物通編輯:葉予
生物通推薦原文:Marcon, E. et al. Assessment of a method to characterize antibody selectivity and specificity for use in immunoprecipitation. Nat Methods. 2015 Jun 29. doi: 10.1038/nmeth.3472.
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