蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上

蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上，同時維持其相對位置和分辨率的過程被稱為轉(zhuǎn)印。轉(zhuǎn)印可通過三種不同的方法來實現(xiàn)：

簡單擴散（Kurien和Scofield，1997）是在凝膠上依次放置膜、一疊干濾紙，并在濾紙上放上重物以促進擴散過程而實現(xiàn)的（Kurien和Scofield，2003）。這種方法可將一塊凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到多塊膜上（Kurien和Scofield，1997），獲得同一塊凝膠的幾個印跡。擴散方法的主要缺點是轉(zhuǎn)移不是定量的，與電泳轉(zhuǎn)印相比只能轉(zhuǎn)移25-50%的蛋白質(zhì)（Chen和Chang，2001）。

真空輔助的溶劑流（Peferoen等，1982）利用泵的抽吸能力，將凝膠上分離的蛋白質(zhì)吸到膜上。高分子量和低分子量的蛋白質(zhì)都可用這種方法轉(zhuǎn)移；不過，分子量低于20 kDa的蛋白質(zhì)需要使用較小的孔徑（0.2 μm），因為它們不易被0.45 μm的膜吸附（Kurien，2003）。蛋白質(zhì)從聚丙烯酰胺凝膠上的真空轉(zhuǎn)印不大常見，主要用于核酸從瓊脂糖凝膠上的轉(zhuǎn)移。

電泳洗脫，或電泳轉(zhuǎn)印（Towbin等，1979）是迄今為止使用最廣泛的轉(zhuǎn)印方法。與擴散或真空轉(zhuǎn)印相比，主要優(yōu)點是速度和轉(zhuǎn)移完全（Kurien等，2003）。

電泳轉(zhuǎn)印技術(shù)

兩種常用的電泳轉(zhuǎn)印技術(shù)是槽轉(zhuǎn)印和半干轉(zhuǎn)印。它們都基于相同的原理，只是容納凝膠/膜堆積層所用的機械裝置和電場的施加不同。

槽轉(zhuǎn)�。▓D6）是一種傳統(tǒng)的技術(shù)，其中凝膠/膜堆積層被完全浸濕在緩沖液槽中，并施加電流。這是一種有效但緩慢的技術(shù)，使用大量緩沖液。槽轉(zhuǎn)印系統(tǒng)一般在恒定電壓下運行；轉(zhuǎn)移過程中緩沖液的混合讓電流保持相對恒定。

圖6. 槽（濕式）轉(zhuǎn)印系統(tǒng)。

半干轉(zhuǎn)印（圖7）以一疊經(jīng)緩沖液浸濕的濾紙取代了緩沖液槽。由于板電極直接接觸濾紙，通過凝膠的場強最大化，利于快速、高效的轉(zhuǎn)移。這種技術(shù)同樣有效，且比槽轉(zhuǎn)印快得多（15-45分鐘）。大多數(shù)半干轉(zhuǎn)印方法使用不止一種緩沖液系統(tǒng)，來實現(xiàn)大蛋白和小蛋白的高效轉(zhuǎn)移。不過，半干轉(zhuǎn)印系統(tǒng)有著較低的緩沖能力，因此不適合長時間轉(zhuǎn)印。半干轉(zhuǎn)印是大的2-D凝膠轉(zhuǎn)印的首選方法。半干轉(zhuǎn)印儀通常在恒定電流下運行；在轉(zhuǎn)移過程中電壓會增加。

對于半干轉(zhuǎn)印系統(tǒng)，濾紙和膜必須切成與凝膠同樣大小，這樣電流才被迫穿過凝膠。否則，電流會通過凝膠周圍的重疊濾紙而短路。在兩種類型的轉(zhuǎn)印系統(tǒng)中，需要格外小心，以避免在濾紙、凝膠和膜之間引入氣泡。氣泡阻礙轉(zhuǎn)移，引起轉(zhuǎn)印膜上的“禿斑”（即無轉(zhuǎn)移區(qū)域）。

圖7. 半干轉(zhuǎn)印系統(tǒng)。

（實際內(nèi)容以《蛋白質(zhì)印跡手冊》印刷版為準，如有錯漏，敬請諒解）

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