自1979年推出以來（Towbin等，1979）蛋白質(zhì)印跡已成為研究實(shí)驗(yàn)室的一種常規(guī)工具。它通常用于檢測復(fù)雜樣品中的少量蛋白質(zhì)，或監(jiān)控蛋白質(zhì)表達(dá)與純化。最簡單的蛋白質(zhì)印跡操作，被稱為斑點(diǎn)印跡或狹縫印跡，利用真空抽濾將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到一塊微孔膜上。盡管這種方法可提供蛋白整體表達(dá)水平的定量信息，并可以平行開展多個(gè)樣品的檢測，但它缺乏蛋白分子量的信息。同時(shí)，特異性也會受損，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)降解產(chǎn)物或翻譯后修飾的異構(gòu)體也能隨著完整蛋白一起被檢測。

Western印跡是一種更為復(fù)雜的操作，它包含通過凝膠電泳來分離蛋白質(zhì)復(fù)合物，隨后電轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)哪ぃㄈ鏟VDF）上。在蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜后，它們可被染色，以便觀察，也可直接通過N端測序、質(zhì)譜分析或免疫檢測來鑒定。免疫檢測包含通過蛋白質(zhì)與特異抗體的反應(yīng)來鑒定這種蛋白質(zhì)。通過空間分辨，這種方法能夠提供各個(gè)蛋白的分子量信息，并能區(qū)分異構(gòu)體、選擇性加工產(chǎn)物及其他的翻譯后修飾形式。

在臨床實(shí)驗(yàn)室，免疫印跡已在傳染病和自身免疫性疾病、過敏及其他領(lǐng)域被證明是有用的（Towbin等，1989；Stahl等，2000）。Western印跡被公認(rèn)是在病毒感染過程中，繼重復(fù)反應(yīng)ELISA之后的一種可靠的確診的臨床檢測，也是一種靈敏、明確而簡單的分析，可提供高度復(fù)雜的信息（Bauer，2001；Mylonakis等，2000；Heermann等，1988）。

Western印跡的應(yīng)用實(shí)例包括通過定量Western分析來分析酵母中的蛋白質(zhì)表達(dá)（Ghaemmadami等，2003），蛋白質(zhì)拷貝數(shù)和區(qū)室化（compartmentalization）的鑒別（Rudolph等，1999），ATP競爭性蛋白激酶抑制的研究（Wang和Thompson，2001），以及作物和食品中轉(zhuǎn)基因生物的檢測（Ahmed，2002）。

無疑，蛋白質(zhì)印跡一直是探索性研究的理想平臺，也依然是評估新抗體及其他蛋白檢測分析（如ELISA、基于磁珠的分析、流式細(xì)胞分析和免疫組化）的標(biāo)準(zhǔn)。然而，同時(shí)分析更多蛋白質(zhì)以鑒定復(fù)雜的蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)的需求，以及保留珍貴樣品的相關(guān)需求，一直在推動(dòng)研究不斷改進(jìn)印跡技術(shù)的靈敏度和速度。一種“雙印跡（double blotting）”方法（Lasne，2001，2003）可消除由于印跡蛋白與無關(guān)二抗之間強(qiáng)的非特異性相互作用造成的假陽性。Far-Western印跡技術(shù)可實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)間特異相互作用的檢測（Grasser，1993），而Southwestern印跡被用于鑒定與特定DNA序列相互作用的蛋白質(zhì)（Silva，1987）。Multistrip Western印跡被證明能提高通量，同時(shí)最大限度減少印跡間的可變性（Aksamitiene，2007）。新一代印跡技術(shù)的特點(diǎn)是產(chǎn)生信號所需的蛋白量減少（Swank，2006），以及改善Western印跡的定量能力（Schilling，2005a；2005b）的各種方法。

更好的膜，更好的印跡。

近四十年來，默克密理博一直是轉(zhuǎn)印膜的領(lǐng)先供應(yīng)商。1975年，E.M. Southern使用這些膜首次開發(fā)出從瓊脂糖凝膠上轉(zhuǎn)移核酸1。第一款用于Western印跡的0.45 μm PVDF基質(zhì)，Immobilon®-P膜，在1985年推出，而第一款用于蛋白質(zhì)印跡和測序的0.2 μm PVDF基質(zhì)，Immobilon®-PSQ膜，在1988年推出。

除了Immobilon® 膜和試劑，默克密理博還為蛋白質(zhì)研究提供了廣泛的其他工具，包括溫和的蛋白質(zhì)提取試劑盒，通過PureProteome™磁珠快速分離蛋白質(zhì)，以及通過Amicon® Ultra離心過濾器高效濃縮。

從何處獲得更多信息

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您還可以找到關(guān)于Western印跡及其他相關(guān)方法的常見問題（FAQ）的答案，地址在：www.emdmillipore.com/wb_faqs

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關(guān)于第六版

隨著蛋白質(zhì)印跡手冊第六版的出版，默克密理博公司一如既往地協(xié)助研究人員緊跟蛋白質(zhì)檢測的前沿進(jìn)展。我們在優(yōu)化抗體濃度和降低背景方面增加了更全面的指引，同時(shí)擴(kuò)展了熒光檢測的數(shù)據(jù)和操作步驟。

這本手冊代表了我們應(yīng)用科學(xué)家的集體經(jīng)驗(yàn)和智慧——正是他們一直積極參與推進(jìn)蛋白質(zhì)印跡和檢測技術(shù)。這本手冊也包含了我們技術(shù)服務(wù)專家所提供的許多最常見的建議，世界各地的科學(xué)家常常聯(lián)系他們尋求幫助。

（實(shí)際內(nèi)容以《蛋白質(zhì)印跡手冊》印刷版為準(zhǔn)，如有錯(cuò)漏，敬請諒解）

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