多發(fā)性硬化癥（MS）是一種累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的慢性炎癥性脫髓鞘疾病，主要影響青壯年并導(dǎo)致進(jìn)行性神經(jīng)功能殘疾，其確切病因尚未完全闡明。傳統(tǒng)研究多關(guān)注主要免疫細(xì)胞群，可能忽略了具有獨(dú)特受體和功能的新免疫細(xì)胞亞群的作用，且觀察性研究易受偏倚影響，難以確立明確的因果關(guān)系。本研究旨在利用孟德爾隨機(jī)化（MR）分析方法，探究731種免疫細(xì)胞特征與MS易感性之間的因果關(guān)系，為理解MS的潛在機(jī)制提供更可靠的見解。

研究采用兩樣本MR設(shè)計(jì)，利用遺傳變異作為工具變量（IVs），以推斷免疫細(xì)胞特征與MS風(fēng)險(xiǎn)之間的因果關(guān)系。免疫細(xì)胞的全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS）數(shù)據(jù)來源于一項(xiàng)對3757名撒丁島人進(jìn)行的涉及731種免疫細(xì)胞特征的分析。MS的GWAS數(shù)據(jù)來自國際多發(fā)性硬化癥遺傳學(xué)聯(lián)盟（IMSGC），包含47,429例病例和68,374例對照。研究進(jìn)行了嚴(yán)格的工具變量篩選、共定位分析、多效性分析與基因關(guān)聯(lián)分析、富集分析以及蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析。統(tǒng)計(jì)方法主要包括逆方差加權(quán)法（IVW）、MR-Egger回歸、加權(quán)中位數(shù)法等，并使用R軟件進(jìn)行所有分析。

通過MR分析，研究發(fā)現(xiàn)兩種免疫細(xì)胞表型與MS風(fēng)險(xiǎn)存在提示性關(guān)聯(lián)：髓系樹突狀細(xì)胞（DC）上的CD11c表達(dá)增加，以及B細(xì)胞上的CD45表達(dá)增加。這兩種關(guān)聯(lián)在多種MR方法中得到驗(yàn)證，并通過異質(zhì)性檢驗(yàn)、水平多效性評估和留一法分析證實(shí)了其穩(wěn)健性。

為了探究B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞參與MS的潛在共同遺傳機(jī)制，研究進(jìn)行了多效性基因篩選。通過MAGMA基因分析，分別發(fā)現(xiàn)20個(gè)、9個(gè)和266個(gè)基因與CD11c+髓系DC、CD45+B細(xì)胞以及MS顯著相關(guān)。進(jìn)一步利用PLACO分析，鑒定出56個(gè)基因同時(shí)與CD45+B細(xì)胞和MS相關(guān)，5個(gè)基因同時(shí)與CD11c+髓系DC和MS相關(guān)，共計(jì)61個(gè)多效性基因。MAGMA < 0.05) between the CD45 on B cell and MS, and CD11c on myeloid DC and MS. (B) GO biological process analysis of pleiotropic genes screened by PLACO. (C) GO cellular components analysis of pleiotropic genes screened by PLACO. (D) GO molecular functions analysis of pleiotropic genes screened by PLACO. (E) KEGG enrichment analysis of pleiotropic genes screened by PLACO.">

對這61個(gè)多效性基因進(jìn)行功能富集分析（GO和KEGG）發(fā)現(xiàn)，它們在生物學(xué)過程中富集于多肽抗原的加工與呈遞、白細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性等；在細(xì)胞組分中富集于MHC蛋白復(fù)合物、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜腔面等；在分子功能中富集于肽抗原、MHC II類蛋白復(fù)合物結(jié)合等。KEGG通路分析顯示，這些基因顯著富集于抗原加工與呈遞、同種異體移植排斥、移植物抗宿主病、I型糖尿病、EB病毒（EBV）感染等通路。組織特異性分析表明，部分多效性基因在腦組織中表達(dá)下調(diào)，在腸道和血液組織中表達(dá)上調(diào)。

對61個(gè)多效性基因進(jìn)行蛋白-蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)分析，發(fā)現(xiàn)HLA蛋白（如HLA-DQA2）處于網(wǎng)絡(luò)中心，并與TNF等分子存在相互作用。通過藥物基因互作數(shù)據(jù)庫（DGIdb）分析，在關(guān)鍵的前20個(gè)蛋白中，有14個(gè)存在可能的靶向藥物。敏感性MR分析顯示，在排除HLA相關(guān)單核苷酸多態(tài)性（SNP）后，CD45+B細(xì)胞與MS之間的關(guān)聯(lián)性方向一致但效應(yīng)值減弱，表明HLA變異強(qiáng)烈影響但并非決定該關(guān)聯(lián)的唯一因素。

研究還利用雙向MR探討了MS對免疫表型的反向影響。研究發(fā)現(xiàn)，在MS存在的情況下，多個(gè)B細(xì)胞亞群的特征發(fā)生改變：IgD⁺CD38^dimB細(xì)胞和初始成熟B細(xì)胞上的B細(xì)胞激活因子受體（BAFF-R）表達(dá)增加；IgD^?CD24^?B細(xì)胞上的CD19表達(dá)增加；IgD⁺CD38^?初始B細(xì)胞上的CD20表達(dá)增加；記憶B細(xì)胞占淋巴細(xì)胞百分比增加。與此同時(shí)，中央記憶CD4⁺T細(xì)胞的絕對計(jì)數(shù)減少。

本研究證實(shí)了B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞在MS發(fā)病中的因果作用，與先前研究一致。B細(xì)胞通過抗原呈遞、細(xì)胞因子產(chǎn)生和抗體生成參與MS，而樹突狀細(xì)胞則通過激活自身反應(yīng)性T細(xì)胞促進(jìn)炎癥。研究強(qiáng)調(diào)了B細(xì)胞在抗原呈遞中的核心作用，這可能破壞自身免疫耐受。富集分析進(jìn)一步證實(shí)了抗原呈遞通路的核心地位。

在機(jī)制層面，研究鑒定出的61個(gè)多效性基因揭示了MS發(fā)展背后涉及這些免疫細(xì)胞類型的復(fù)雜遺傳互作。其中，HLA基因，特別是HLA-DQB1、HLA-DRB1和HLA-DRB5，是MS發(fā)病機(jī)制的核心。這些基因的表達(dá)模式驗(yàn)證了它們在MS中的關(guān)鍵作用。研究還觀察到MS發(fā)病后免疫細(xì)胞亞群的顯著改變，特別是B細(xì)胞亞型中BAFF-R等關(guān)鍵分子表達(dá)上調(diào)，提示特定的B細(xì)胞亞型在疾病進(jìn)展中扮演角色，這些變化有潛力作為MS的診斷標(biāo)志物。

本研究的局限性包括所使用的GWAS數(shù)據(jù)僅限于歐洲人群，未來需要納入不同種族群體以擴(kuò)展研究結(jié)果的適用性。此外，未深入探討免疫細(xì)胞間的相互作用，且因缺乏MS亞型和疾病嚴(yán)重程度的臨床數(shù)據(jù)，限制了探究免疫細(xì)胞改變與MS臨床進(jìn)展之間關(guān)系的能力。

總而言之，本研究通過建立免疫細(xì)胞表型（特別是B淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞）與MS之間的因果聯(lián)系，為MS的遺傳和免疫學(xué)基礎(chǔ)提供了關(guān)鍵見解。鑒定出的61個(gè)多效性基因以及關(guān)于B細(xì)胞在抗原加工和呈遞中關(guān)鍵作用的發(fā)現(xiàn)，突出了HLA基因作為潛在治療靶點(diǎn)的重要性。這項(xiàng)工作不僅加深了對MS發(fā)病機(jī)制的理解，也為未來的診斷策略和針對免疫細(xì)胞的精準(zhǔn)治療研究鋪平了道路。