VIRMA/IGF2BP3-m6A軸驅(qū)動ANLN高表達：肝內(nèi)膽管癌（ICC）RhoA/YAP1/TEAD1正反饋環(huán)路的新靶點與干預策略
《Cell Death & Disease》：VIRMA/IGF2BP3-mediated ANLN upregulation promotes intrahepatic cholangiocarcinoma growth by forming a positive feedback loop with RhoA/YAP1/TEAD1 signaling pathway
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（ANLN）高表達通過（RhoA）-（YAP1）/（TEAD1）正反饋環(huán)路加速（ICC）生長，而（VIRMA）介導的m6A修飾與（IGF2BP3）依賴的mRNA穩(wěn)定是其上游關鍵；降脂藥辛伐他汀及光敏劑維替泊芬可打斷該軸，為ICC提供老藥新用的精準治療思路。
研究背景
肝內(nèi)膽管癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）占肝臟原發(fā)惡性腫瘤的20%，發(fā)病率持續(xù)攀升。由于缺乏敏感早篩標志物，多數(shù)患者初診即晚期，失去手術機會；標準化療及免疫治療應答率低，5年生存率不足20%。因此，解析ICC惡性增殖的分子機制并發(fā)現(xiàn)可干預靶點，一直是肝膽腫瘤領域的“瓶頸”課題。
研究思路
作者從“細胞分裂失控”這一腫瘤Hallmark出發(fā)，整合MSigDB數(shù)據(jù)庫199條紡錘體相關基因與TCGA、GEO、E-MTAB-6389三大轉(zhuǎn)錄組，篩選出在ICC中普遍高表達且與病理分級正相關的候選驅(qū)動基因——ANLN（anillin，肌動蛋白結(jié)合蛋白）。
ANLN在ICC中的表達特征
多中心數(shù)據(jù)（n=1,037例）顯示，ANLN mRNA在ICC組織較配對癌旁升高3.1–7.8倍；cProSite蛋白組學亦證實其蛋白水平在10種實體瘤中顯著上調(diào)。對98例中國ICC手術標本的免疫組化揭示，ANLN高表達組（H-score≥120）的無復發(fā)生存期（RFS）縮短一半以上（中位RFS 9.3個月 vs 21.7個月），多因素Cox確認其為獨立不良預后因子（HR=1.87，p<0.01）。
表觀遺傳調(diào)控：VIRMA-m6A-IGF2BP3軸
基因組測序排除ANLN擴增/突變（頻率<3%），提示轉(zhuǎn)錄后修飾主導其高表達。SRAMP預測ANLN 3'UTR存在4處高置信m6A位點；在4個ICC數(shù)據(jù)集中，僅m6A“寫入酶”VIRMA（KIAA1429）與ANLN呈穩(wěn)健正相關（r>0.62）。MeRIP-qPCR證實，VIRMA敲除使ANLN m6A峰值下降62%，mRNA半衰期由9.5 h縮短至4.2 h；而過表達VIRMA則延長半衰期至14.8 h。進一步篩選“讀取蛋白”發(fā)現(xiàn)，IGF2BP3而非YTHDF家族與ANLN表達關聯(lián)最強。RIP顯示IGF2BP3直接結(jié)合ANLN 3'UTR；敲低IGF2BP3同樣加速mRNA衰變，并降低蛋白水平。臨床樣本中，VIRMA、IGF2BP3與ANLN蛋白表達兩兩正相關（r≥0.55），三指標聯(lián)合可更精準地預測術后復發(fā)（AUC=0.84）。
ANLN的腫瘤生物學功能
功能獲得與缺失實驗表明，ANLN敲除導致ICC細胞出現(xiàn)大量雙核/多核（≥4N）及γH2AX DNA損傷灶，G2/M阻滯、Annexin V凋亡比例升高3.4倍；皮下移植瘤體積縮小68%。反之，ANLN過表達使細胞增殖速率提高1.9倍，集落形成能力增強2.3倍，且可在低血清條件下維持YAP1核定位。
分子機制：RhoA/YAP1/TEAD1正反饋環(huán)路
機制層面，ANLN作為RhoA激活的“腳手架”，招募ECT2、PLK1、RACGAP1至收縮環(huán)，促進RhoA-GTP加載。GSEA顯示高ANLN組顯著富集“RHO GTPase effectors”與“Hippo pathway suppression”。Pull-down實驗表明，ANLN過表達使RhoA-GTP水平升高2.1倍，伴隨LATS1及YAP1磷酸化降低，YAP1入核增多；而RhoA抑制劑辛伐他汀或Rhosin可逆轉(zhuǎn)上述改變。
轉(zhuǎn)錄組證據(jù)與正反饋閉合
YAP1-TEAD1是Hippo通路的效應臂。JASPAR預測ANLN啟動子區(qū)含3處TEAD1結(jié)合基序（-1 753/-1 228/-682 bp）。ChIP-qPCR證實YAP1/TEAD1在上述位點顯著富集；熒光報告實驗顯示，逐段刪除TEAD1結(jié)合序列后，ANLN啟動子活性依次下降38%、61%、79%。更重要的是，組成型活性YAP5SA突變體能部分挽救ANLN敲除導致的生長抑制，而YAP1抑制劑維替泊芬或TEAD抑制劑CA3則下調(diào)ANLN mRNA與蛋白，從而閉合“ANLN-RhoA-YAP1-TEAD1-ANLN”正反饋軸。
老藥新用：辛伐他汀與維替泊fin的干預潛力
鑒于該軸的可成藥性，作者選用臨床常用降脂藥辛伐他汀（RhoA抑制劑）及眼科光敏劑維替泊芬（YAP-TEAD阻斷劑）。體外實驗中，兩藥均顯著抑制ANLN高表達細胞的增殖（IC50下降約40%），并破壞YAP1核定位。小鼠異種移植模型顯示，辛伐他汀（5 mg kg，ip，5次/周）或維替泊芬（100 mg kg，隔日ip）處理3周，可使ANLN過表達誘導的腫瘤體積分別縮小52%與48%，且未引起體重下降，提示良好安全性。
研究意義與展望
該工作首次闡明ICC中“表觀轉(zhuǎn)錄組-m6A-ANLN-細胞分裂-Hippo”這一縱向調(diào)控鏈，并揭示其自我放大的正反饋屬性；同時提供老藥辛伐他汀與維替泊芬的 repurposing 依據(jù)。未來可進一步探索：
聯(lián)合靶向m6A修飾酶或YAP1能否克服ICC對吉西他濱+順鉑的化療耐藥；
ANLN-RhoA信號是否通過調(diào)控腫瘤相關巨噬細胞極化影響免疫微環(huán)境；
基于血清/膽汁外泌體ANLN m6A水平開發(fā)無創(chuàng)早篩策略。
結(jié)論
VIRMA/IGF2BP3介導的m6A修飾維持ANLN mRNA穩(wěn)定，高表達ANLN通過激活RhoA抑制Hippo通路，進而借助YAP1-TEAD1轉(zhuǎn)錄自身，形成驅(qū)動ICC快速增殖與分裂失控的“死循環(huán)”。臨床已上市的辛伐他汀與維替泊芬可有效打斷該環(huán)路，為缺乏靶向治療的ICC提供了一條可快速轉(zhuǎn)化的精準干預新路徑。
