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破解第三代轉錄組多樣本混測的技術難題
【字體: 大 中 小 】 時間:2018年01月02日 來源:寶盈同匯
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Tiosbio的第三代全長轉錄組文庫構建試劑盒,采用獨特的引物設計系統,兼容PacBio和nanopore測序平臺。同時,使測序得到片段為mRNA全長。簡化建庫步驟,使建庫效率提高40%。采用自主知識產權的bacode設計,減少數據損失,增加樣本通量。
北京寶盈同匯生物技術有限公司推出了國內首款具有完全自主知識產權、兼容PacBio和Oxford Nanopore測序平臺的第三代轉錄組文庫構建試劑盒。該試劑盒由北京寶盈同匯生物技術有限公司研發團隊研發,通過與中國農業科學院作物科學研究所劉君研究員和中國農業科學院生物技術研究所王歡研究員共同開發完成,并同天津生物芯片技術有限責任公司、武漢未來組生物科技有限公司合作完成測試工作,11月19日和12月7日成功完成PacBio RSII平臺和Oxford Nanopore平臺單個cell進行多樣本全長轉錄組混合測序的測評工作。由于目前中國區尚未銷售Oxford Nanopore的全長轉錄組文庫構建試劑盒,北京寶盈同匯生物技術有限公司實質上進行了國內Oxford Nanopore全長轉錄組的首測。

北京寶盈同匯生物技術有限公司研發的Tiosbio®全長轉錄組文庫構建試劑盒與市場上的同類產品相比具有以下特點:
1. 反轉錄體系缺失RNase H活性,延伸能力強,適用于較長的cDNA合成。該反轉錄體系具備卓越的末端轉移酶活性,實現mRNA5′末端模板的高效跳轉,可以獲得高比例的全長cDNA文庫。
2.具有自主知識產權的反轉錄引物和擴增引物。通過對反轉錄引物的特殊修飾,實現了試劑盒能夠藍冰運輸,-20℃貯存,大大降低了試劑運輸和貯存成本。而擴增引物的獨特修飾方式確保了輸出數據均為全長數據,大幅降低了下機數據的背景和噪音,使數據的后續處理更為方便和快捷。
3. 完美地兼顧PacBio RSII平臺和Oxford Nanopore平臺的后續操作,操作流程與兩大測序平臺實現無縫對接。PacBio測序平臺適用試劑盒去除了DNA損傷修復和末端修復步驟,使建庫效率提高40%;Oxford Nanopore平臺去除了末端修復步驟,使建庫效率提高20%。大幅縮減了相應的試劑和人工成本,真正意義上實現了一天內完成全長轉錄組的建庫工作。
4. 研發了適應第三代轉錄組文庫構建的離心柱型PCR產物純化試劑盒,在5 min內即可去除單鏈擴增產物、引物二聚體和小于500bp的雙鏈擴增產物,大幅增加長距離PCR產物與測序接頭的連接效率,避免了小片段擴增產物在測序芯片中占位造成的測序資源浪費,提高了測序粗數據的輸出質量。
5. 獨特的barcode設計,破解了因第三代轉錄組測序平臺高錯誤率,無法在單個cell完成多個樣本轉錄組文庫混測的技術難題,大幅提高了三代測序平臺的樣品通量。