人誘導多能干細胞（Human induced pluripotent stem cells，人iPS細胞) 是一個功能強大的研究工具和疾病模型，因為其具備無限增殖、自我更新、分化為多種細胞類型的能力，而且人iPS細胞還可以再現(xiàn)細胞來源個體的疾病表型和基因型。人iPS細胞結(jié)合新的CRISPR/Cas9的基因編輯技術(shù)，就可以進行疾病模型中遺傳變異的功能性研究以及更深遠的再生醫(yī)學研究。

CRISPR/Cas9系統(tǒng)只需一個Cas9核酸酶結(jié)合一個單鏈向?qū)�RNA（ single guide RNA，sgRNA)就可以決定其靶向特異性，進行基因編輯 (Jinek et al. 2012)。這兩個組件可以通過多種方法成功導入至靶細胞，如載體表達系統(tǒng)，RNA轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，或直接導入Cas9/sgRNA核糖核蛋白(ribonucleoprotein，RNP)復合物(Sander and Joung 2014)。與載體表達系統(tǒng)相比，直接導入Cas9/sgRNA RNPs提供了一種快速轉(zhuǎn)入基因編輯實驗的方法，同時脫靶效應的可能性更小 (Kim et al. 2014)。Takara旗下的Clontech品牌提供兩種Cas9/sgRNA RNPs導入方法，即電穿孔（Electroporation）導入系統(tǒng)或者納米囊泡（Gesicle）導入系統(tǒng)，幫助您實現(xiàn)高效的、低脫靶效應的基因編輯。

一旦Cas9/sgRNA RNP復合物被導入, 為了分離和篩選感興趣的基因型，單細胞需要被分離并擴增為克隆細胞系。傳統(tǒng)的hiPS 細胞以集落狀生長和傳代，不利于進行單細胞分離和單細胞培養(yǎng)，為基因編輯后hiPS 細胞建立克隆增加了難度。Takara旗下Cellartis品牌的DEF-CS™ culture system（Asplund et al. 2016）是一個支持無飼養(yǎng)層、基于細胞單層培養(yǎng)的系統(tǒng)，規(guī)避了集落狀培養(yǎng)帶來的挑戰(zhàn)，允許單細胞傳代和促進接種的單細胞存活和后續(xù)擴增，幫助您獲得基因編輯后感興趣的單細胞克隆。

從開始到結(jié)束，Takara全套的人iPS細胞基因編輯工具任您選擇。

Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一個完整的，在無飼養(yǎng)層和成分確定條件下，用于hiPSCs有效擴增和擴大生產(chǎn)的系統(tǒng)。試劑盒包含了從接種單細胞至96孔板到擴增至48孔板過程中所有必要的試劑。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643) 是一個完整的系統(tǒng)，允許通過電穿孔的方法對hiPSCs進行有效的基因編輯以及隨后的單細胞克隆形成和擴增至48孔板。該系統(tǒng)中提供了重組Cas9蛋白質(zhì)，以及產(chǎn)生大量sgRNAs所有必要的試劑，用于電穿孔hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (前面所述) 組份，用于進行基因編輯后的單細胞克隆形成和擴增。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)是一個完整的系統(tǒng)，允許通過gesicle導入Cas9/sgRNA復合物進行有效的基因編輯隨后的單細胞克隆形成和擴增至48孔板。Gesicles是一種無毒的、高效的、替代電穿孔的方法，不依賴昂貴的設(shè)備或耗材。系統(tǒng)中提供所有的必要試劑用于產(chǎn)生細胞衍生的納米囊泡（稱做gesicles），來轉(zhuǎn)導Cas9和sgRNA至hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit（前面所述）組份，用于進行基因編輯后的單細胞克隆形成和擴增。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

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