ThruPLEX Tag-seq Kit 基于新的ThruPLEX技術(shù)，采用帶有特別分子標(biāo)簽（UMT）的ThruPLEX引物構(gòu)建帶有分子標(biāo)記和樣品檢索引物的Illumina NGS文庫。每個(gè)試劑盒包含超過1,600萬個(gè)特別序列用于在擴(kuò)增前標(biāo)記每條DNA片段，可以在文庫制備、目標(biāo)富集和數(shù)據(jù)分析過程中追蹤DNA片段，以檢測(cè)低豐度等位基因或計(jì)數(shù)獨(dú)立片段。

ThruPLEX Tag-seq采用ThruPLEX 技術(shù)設(shè)計(jì)及優(yōu)化，可以1到50 ng DNA起始構(gòu)建高多樣性、高重復(fù)性文庫。整個(gè)流程在單管或單孔中就可完成，只需3步，2小時(shí)，無需中間純化步驟和樣品轉(zhuǎn)移，避免了操作誤差和樣品損失。ThruPLEX Tag-seq Kit 包含所需全部試劑，包括可以多重標(biāo)記96個(gè)樣品的檢索引物。純化和定量后，文庫可以采用標(biāo)準(zhǔn)Illumina測(cè)序試劑和流程在Illumina NGS平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序。同時(shí)采用Curio Genomics提供的云服務(wù)軟件或開源軟件進(jìn)行生物信息學(xué)分析，從而快速獲得研究結(jié)果。

ThruPLEX Tag-seq兼容主流平臺(tái)實(shí)現(xiàn)強(qiáng)有力的目標(biāo)區(qū)域富集，如Agilent SureSelect® and Roche NimbleGen SeqCap® EZ。

圖1： ThruPLEX Tag-seq技術(shù)流程

 
圖2：使用本kit 對(duì)30 ng 1% Horizon cfDNA standard，采用 ThruPLEX Tag-seq構(gòu)建文庫。Agilent SureSelect富集目標(biāo)區(qū)域，~5,000X覆蓋度測(cè)序，采用Curio Genomics生物信息學(xué)平臺(tái)分析數(shù)據(jù)。采用原始數(shù)據(jù)分析，EGFR 的突變（黃色點(diǎn)）會(huì)被背景誤差遮蓋（左圖）。而在數(shù)據(jù)分析過程中使用UMT修正誤差，突變更容易識(shí)別（右圖）。

圖3：使用本kit 對(duì)30 ng（A）或10 ng Horizon cfDNA standard采用ThruPLEX Tag-seq構(gòu)建文庫，240 KB定制panel（NimbleGen SeqCapEZ）富集目標(biāo)區(qū)域，HiSeq 2500 ~5,000X覆蓋度測(cè)序。Curio Genomics生物信息學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

*數(shù)據(jù)來源于Takara Bio Inc.