眾所周知，B 細胞是適應性免疫應答的重要組成部分，其表面表達B細胞受體（BCR），可以識別病原體中的特定分子模式。

了解BCRs圖譜（也就是由特定H,K,L基因片段構成的受體和克隆型多樣性）不僅有助于深入了解健康個體中的適應性免疫應答，也有助于了解多種疾病的適應性免疫應答。準確確定免疫系統表達的克隆型和同種型有助于全面了解B細胞群體。

新推出的SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit基于5’RACE和NGS技術，提供了一種靈敏，準確，優化的BCR庫分析方法。

雖然采用多重PCR可以在一個反應中對多個BCR基因進行擴增，但也被證明在對特定序列進行擴增時存在靈敏度，特異性和偏差的問題，這些都可能帶來同種型的鑒別困難。而5’RACE方法減少了變異性并且可以從BCR重鏈或輕鏈的恒定區引發擴增。

試劑盒將這些優點與基因特異性擴增相結合可以捕獲BCR完整V(D)J可變區，提供了一種高靈敏度、可重復的B細胞庫分析方法。在大部分情況下，通過H/K/L鏈的下游測序分析可以準確鑒別克隆型，可靠確定同種型。

 
圖1. BCR重排過程。

祖細胞發育過程中胚系基因片段經過V,D,J重排形成兩條相同的重鏈。V,J片段重排形成兩條相同的輕鏈。V,D,J片段連接處的核苷酸隨機插入或缺失增加了額外的多樣性。B細胞經過免疫應答刺激后通過體細胞高頻突變（SHM）進一步引入更多的點突變。 

 
圖2. SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit技術流程。

PanelA dT-引物起始合成一鏈cDNA，經過兩輪PCR擴增合成cDNA文庫。PCR產物經純化，片段篩選和質量檢測后用于測序分析。

PanelB對于每個樣品，在樣品中所有mRNA 進行RT反應后，使用者可以通過兩輪基因特異性巢式PCR特定擴增IgG 的1-3條鏈。

 
圖3. 準確擴增所有5種IgG亞類。

以來自于不同IgG亞型的自有雜交瘤（10E8）和兩個ATCC雜交瘤樣品（HB-8117和TIB-127）的10 ng RNA起始，采用SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit構建包含BCR重鏈和輕鏈（kappa）的文庫。Panel A Bioanalyzer結果顯示了每個雜交瘤重鏈和輕鏈的基因特異性擴增結果。在每個樣品中都觀察到了700-900 bp的預期峰值。電泳圖中明顯的峰表明在這些雜交瘤中表達kappa鏈。相反，lambda鏈測序庫相對較寬并且大小低于預期。每個樣品中標注為“LM”和“UM”的峰為DNA reference marker。Panel B 采用MiXCR軟件（version 1.8）確定比對指標，與所有IG序列進行了比對分析。MiXCR軟件對前2個克隆的分析結果顯示了V,D,J等位基因及通過軟件分析確定的同種型和亞類。