Wes 新一代超微量樣品全自動(dòng)蛋白質(zhì)表達(dá)定量分析系統(tǒng)是美國(guó)ProteinSimple公司經(jīng)典創(chuàng)新產(chǎn)品Wes全自動(dòng)蛋白質(zhì)表達(dá)定量分析系統(tǒng)的升級(jí)版，擁有更多獨(dú)到優(yōu)勢(shì)。

獨(dú)有創(chuàng)新技術(shù)特點(diǎn)：
1. 化學(xué)發(fā)光信號(hào)值直接定量
2. 低至25個(gè)細(xì)胞的靈敏度
3. 2-440KD分子量范圍
4. 無(wú)需轉(zhuǎn)膜
5. 全自動(dòng)化標(biāo)準(zhǔn)化
6. Western blot全程只需3小時(shí)
7. 6個(gè)數(shù)量級(jí)的HDR（寬動(dòng)態(tài)范圍曝光）模式

應(yīng)用實(shí)例：

1. 培養(yǎng)胚胎。 2016年Nature文章在132個(gè)小鼠2-Cell胚胎中檢測(cè)關(guān)鍵蛋白

發(fā)育生物學(xué)，干細(xì)胞研究等領(lǐng)域的科學(xué)家，需要在特定胚胎發(fā)育時(shí)期檢測(cè)關(guān)鍵蛋白質(zhì)表達(dá)水平，研究胚胎，胚胎干細(xì)胞等發(fā)育中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白。2016年9月頂級(jí)雜志Nature，發(fā)表了挪威奧斯陸大學(xué)附屬醫(yī)院，美國(guó)加州路德維格癌癥研究所科學(xué)家發(fā)表的文章，Broad histone H3K4me3 domains in mouse oocytes modulate maternal-to-zygotic transition，doi:10.1038/nature19360，Nature, Vol 537,548-552。組蛋白動(dòng)態(tài)甲基化修飾在母體-合子過(guò)渡非常重要，但是在微量細(xì)胞中分析染色體組蛋白甲基化修飾存在技術(shù)瓶頸，本文作者開發(fā)了微量樣品的Chip-sequence技術(shù)進(jìn)行母體-合子過(guò)渡過(guò)程中組蛋白甲基化。KDM5A 和 KDM5B是母體-合子過(guò)渡必須蛋白，因此基因敲除是研究必須手段。在基因敲除后，需要在蛋白水平確認(rèn)敲除結(jié)果。

培養(yǎng)的胚胎珍貴，少量細(xì)胞無(wú)法用傳統(tǒng)蛋白質(zhì)分析技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，ProteinSimple公司創(chuàng)新使用400nl毛細(xì)管進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)定量檢測(cè)，解決了胚胎發(fā)育研究中微量樣品蛋白質(zhì)檢測(cè)問(wèn)題。

2. 激光顯微切割

激光顯微切割技術(shù)Laser capture microdissection (LCM)是從異質(zhì)性組織樣本中分離純的細(xì)胞群，非常有用的方法。

激光顯微切割獲得細(xì)胞量非常有限，通常一次激光顯微切割樣品中的蛋白量，只夠一次傳統(tǒng)western blot，如果需要進(jìn)行多靶蛋白檢測(cè)，則樣本量不夠。更難用質(zhì)譜等技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

East Tennessee State University，內(nèi)科學(xué)系科學(xué)家Mary Howell，將LCM和Wes結(jié)合起來(lái)，開發(fā)了微量樣組織品獲取及蛋白質(zhì)表達(dá)定量分析平臺(tái)。只需要使用1/20的激光顯微切割組織蛋白裂解液即可進(jìn)行相應(yīng)靶蛋白檢測(cè)。一次激光顯微切割樣本可以進(jìn)行需要的多種靶蛋白檢測(cè)。

3. 分選腫瘤干細(xì)胞/造血干細(xì)胞/免疫細(xì)胞

在很多生物醫(yī)學(xué)研究中，需要使用磁珠或者流式，通過(guò)特定的marker，分選特定的細(xì)胞群，避免混合細(xì)胞對(duì)于生物醫(yī)學(xué)研究的干擾。 但是分選到的細(xì)胞，數(shù)量通常都極其微量，在10000個(gè)左右，比如腫瘤干細(xì)胞等，造血干細(xì)胞等。微量細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)水平分析，一直是世界性的難題。

2016年世界著名大學(xué)，西班牙薩拉曼卡大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院的科學(xué)家，使用磁珠分選CD34+造血祖細(xì)胞，然后將來(lái)自于骨髓異常增生綜合癥的外泌體（MVs-MSD）及正常人的外泌體（MVs-HD），轉(zhuǎn)染入分選CD34+造血祖細(xì)胞，研究骨髓異常增生綜合癥患者的外泌體對(duì)MDM2的調(diào)節(jié)作用。

參考文獻(xiàn)：
Microvesicles from Mesenchymal Stromal Cells Are Involved in HPC-Microenvironment Crosstalk in Myelodysplastic Patients.PLOS ONE | DOI:10.1371/journal.pone.0146722 February 2, 2016

4. 稀缺生物醫(yī)學(xué)樣本

生物醫(yī)學(xué)研究中，很多研究樣品珍貴，稀缺。比如：

▪ 靈長(zhǎng)類動(dòng)物樣本
▪ 動(dòng)物胚胎
▪ 臨床穿刺樣本
▪ 醫(yī)院臨床樣本庫(kù)
▪ 罕見/典型疾病樣本

在很多發(fā)育研究中，動(dòng)物胚胎，比如小鼠胚胎是必須的模型。 從小鼠胚胎中提取特定組織，分選特定細(xì)胞群進(jìn)行研究，面臨細(xì)胞數(shù)量非常少的問(wèn)題。2016年著名血液病雜志Blood刊發(fā)了美國(guó)辛辛那提大學(xué)辛辛那提兒童醫(yī)學(xué)中心，血液腫瘤研究所科學(xué)家的文章。科學(xué)家發(fā)現(xiàn)Rho-A缺失會(huì)導(dǎo)致貧血。

科學(xué)家建立了Rho-A缺陷小鼠，從E13.5胚胎特異分選紅細(xì)胞及胚胎肝臟CD71+細(xì)胞，使用Wes進(jìn)行Rho-A檢測(cè)，確認(rèn)Rho-表達(dá)水平。發(fā)現(xiàn)RhoA缺陷可以引起下游citron激酶下調(diào)，組織網(wǎng)織紅細(xì)胞有絲分裂，引起貧血。

影像檢測(cè)E13.5胚胎鼠卵黃囊和胚胎肝，RhoA缺陷顯示明顯貧血

紅細(xì)胞及胚胎CD71+細(xì)胞中檢測(cè)RhoA表達(dá)水平

RhoA 下游參與細(xì)胞分裂微管組裝的蛋白Cit-K，在RhoA缺失胚胎肝臟Ter119+網(wǎng)織紅細(xì)胞，明顯下調(diào)。

參考文獻(xiàn)：
Cytokinesis failure in RhoA-deficient mouse erythroblasts involves actomyosin and midbody dysregulation and triggers p53 activation. BLOOD, 17 SEPTEMBER 2015 x VOLUME 126, NUMBER 12

5. 寬動(dòng)態(tài)范圍曝光模式

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