從事蛋白研究常常會遇到這樣的問題：

找不到合適的檢測低豐度蛋白的方法；
得不到令人信服的蛋白相互作用的結果；
擔心蛋白過表達或融合標簽后會改變其原有的功能……

而今這些都不再成為問題，來看看新一代蛋白研究利器——Duolink® PLA®技術到底有多強大。

與傳統的免疫測定相比，Duolink提供了一種簡單、靈敏度高的原位檢測內源蛋白的方法。該實驗基于鄰位連接技術（Proximity Ligation Assay, PLA），當一對PLA 探針足夠接近（<40 nm）時會產生PLA信號，PLA信號的位置直接反映了蛋白表達量或蛋白復合體的亞細胞定位。

了解Duolink 如何檢測過去使用Co-IP方法無法檢測到的蛋白質間相互作用：
Smad蛋白質與AP-1元件間的特殊相互作用決定了TGF-beta誘導的乳腺癌細胞侵襲。Sundqvist, A.等，Oncogene 2012年8月27日

了解Duolink如何檢測單磷酸化修飾：
對乳腺癌中異構體特異性的Akt活化進行鄰位連接分析鑒定得到活化的Akt1驅動著癌癥演進。Spears, M.等J. Pathol. 227, (2012).

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Duolink® 應用舉例

1、檢測穩定、瞬時和微弱的蛋白互作

Fig. 1 加入雌二醇培養48 hr的大鼠胚胎海馬神經元，原位顯示ER α與DYX1C1在神經突觸中的互作。
紅色：ER alpha/DYX1C1復合物；
綠色：actin蛋白；藍色：細胞核

2、檢測蛋白的翻譯后修飾

Fig. 2 EGF刺激前后，用免疫熒光染色和PLA方法檢測U343細胞中EGFR磷酸化水平的變化。PLA方法可以檢測到EGFR的激活，而IF方法則不能。
紅色：磷酸化的EGFR蛋白；藍色：細胞核

3、高靈敏性的檢測低豐度蛋白的表達

Fig. 3 分別用免疫熒光（左下圖）和PLA方法（上圖）檢測A431細胞中EGFR的表達。與IF方法相比，PLA方法的信噪比高出100倍。紅色：EGFR蛋白；藍色：細胞核

更多信息請訪問sigma.com/duolink

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