每個細胞都是獨一無二的，這讓人們不再滿足于細胞群體的研究，而是對細胞之間的異質性愈發感興趣。單細胞測序、單細胞成像，正成為如今的研究熱點。不過，當你需要了解復雜生物樣品的組成和行為時，單細胞蛋白表達信息卻是至關重要的。

為此，ProteinSimple推出了全球首款單細胞Western平臺。這臺名叫Milo的儀器讓你能夠在單細胞水平上開展western blotting。現在，你可以平行分析數千個細胞，了解蛋白表達的異質性。你也可以對單個細胞中數十個目標蛋白進行多重檢測，這意味著你可以更好地了解目標表達之間的相關性。

單細胞Western技術是由美國加州大學伯克利分校的Amy Herr實驗室開發的。2014年6月，這項成果發表在《Nature Methods》雜志上，并引起了科學界的廣泛興趣。之后，Amy Herr和研究生Kelly Gardner，以及同事Josh Molho創辦了Zephyrus Biosciences，這家公司在今年3月被ProteinSimple的母公司Bio-Techne收購。

Milo是如何工作的？

Milo是在scWest芯片上開展單細胞Western檢測的。這種預制的聚丙烯酰胺凝膠包含6400個微孔，可平行捕獲~1000個單細胞，開展1000次單細胞Western。

你需要做的只是將樣品制備成單細胞懸液，而不需要裂解細胞，也不需要固定和透化。之后，將1 mL單細胞懸液加在scWest芯片上，讓它靜置5-15分鐘。在重力的作用下，細胞沉降到微孔內。

接著，將芯片放入Milo中。在五分鐘的時間內，它自動裂解芯片捕獲的1000個細胞，并對每個裂解物開展SDS-PAGE分離。之后，Milo利用光讓分離的蛋白質與凝膠共價結合。這個固定步驟讓你擺脫了耗時且低效的轉印。

在固定之后，你需要將芯片取出，放入Milo的雜交室中，讓蛋白與抗體雜交。Milo不需要特殊的抗體或試劑，因此平常用的Western抗體就行。經過一抗和二抗的孵育，芯片上的熒光可利用普通的芯片掃描儀來掃描。之后，Scout軟件自動開展數據分析，為你提供每個細胞的定量表達結果。

一個流程，多個目標

若你的某個蛋白目標，在流式分析中無法檢測，那么試試Milo吧。它除了能檢測細胞表面蛋白，還能檢測細胞內蛋白、轉錄因子、磷酸化蛋白，以及沒有流式抗體的目標。要知道，Western抗體至少是流式抗體的10倍，因此你的檢測范圍一下子擴大了。

你也可以同時檢測相同細胞中的磷酸化蛋白和總蛋白，了解磷酸化程度隨時間的變化。此外，你也可以利用Milo提供的sizing信息來鑒定蛋白異構體，而這是流式分析無法做到的。

通過這些測定，你可以了解目標表達的異質性和細胞類型的異質性。有些細胞的表達量很高，而有些細胞很低。Milo能夠輕松測定這些細胞之間的差異，并量化各種蛋白的表達變化。同時，Milo也能數出有多少細胞表達特定蛋白，幫助你確定混合樣品中的細胞亞型。

scWest芯片上的樣品可保存9個月之久。因此，你可以在幾個星期甚至幾個月之后，重新分析你的樣品，搜索新問題的答案。如果你同時開展單細胞RNA-Seq實驗，也能等到測序實驗完成后，再確定需要用Milo來驗證哪些數據。總之，有了Milo，單細胞的基因表達分析就不再是難題。（生物通 余亮）

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