Western blot雖然是蛋白質(zhì)研究中最常用的技術(shù)之一，但想說(shuō)愛(ài)它也不容易。這是一項(xiàng)非常不確定的技術(shù)。有時(shí)，忙上一天，最后什么結(jié)果也沒(méi)有。有時(shí)，結(jié)果挺好，但再也重復(fù)不了。據(jù)統(tǒng)計(jì)，Western blot的實(shí)驗(yàn)差異性高達(dá)35-45%。這使得人們陷入了深深的憂慮：如何才能讓W(xué)estern blot的結(jié)果更加一致呢？

如今，這個(gè)問(wèn)題有了一個(gè)很好的答案。GE Healthcare的Amersham WB系統(tǒng)集成了標(biāo)準(zhǔn)化的Western blot實(shí)驗(yàn)流程，包括電泳、轉(zhuǎn)印、印跡和成像分析功能，有望大大減少實(shí)驗(yàn)中的差異，帶來(lái)一致的、定量的蛋白質(zhì)分析結(jié)果。這臺(tái)完全一體化的系統(tǒng)由GE Healthcare位于瑞典烏普薩拉的蛋白科學(xué)卓越中心實(shí)驗(yàn)室研發(fā)，在2014年底上市。

 
圖1. Amersham WB主機(jī)

Amersham WB由主機(jī)、軟件和專屬耗材組成。Amersham WB主機(jī)（圖1）包括兩部分：電泳掃描單元（左）和印跡單元（右）。電泳掃描單元主要負(fù)責(zé)SDS-PAGE以及凝膠或膜成像；而印跡單元?jiǎng)t用于轉(zhuǎn)印、雜交孵育和干燥。

有了Amersham WB系統(tǒng)，Western blot實(shí)驗(yàn)可在4小時(shí)之內(nèi)完成，而無(wú)需一整天的漫長(zhǎng)等待。無(wú)論你是開(kāi)展傳統(tǒng)的單色分析，還是定量的雙通道分析，它都能搞定。下面我們就來(lái)看看Amersham WB系統(tǒng)是如何帶來(lái)一致結(jié)果的。

第1步：電泳（42分鐘）

在這一步中，電泳裝置能夠在恒定溫度下提供高度均一的電流，再加上標(biāo)準(zhǔn)化的試劑和耗材，Amersham WB系統(tǒng)大大提高聚丙烯酰胺凝膠電泳的一致性。Amersham WB預(yù)制膠優(yōu)化了濃縮膠和分離膠的區(qū)域，可帶來(lái)出色的分辨率；而配套的電泳緩沖液條取代了液體緩沖液，使用方便且重復(fù)性好。這些特征讓電泳步驟的變化降至最低程度，產(chǎn)生了容易定量和分析的條帶。

GE Healthcare還提供了Amersham WB Cy5總蛋白標(biāo)記試劑，可以很容易地預(yù)標(biāo)記蛋白質(zhì)，這樣在電泳后無(wú)需染色即可直接檢測(cè)總蛋白。利用Cy5總蛋白信號(hào)歸一化目標(biāo)信號(hào)，可以校正上樣誤差，而無(wú)需預(yù)先定量。

第2步：轉(zhuǎn)印（30分鐘）

從制作三明治，到蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上，所有關(guān)鍵的參數(shù)和組件都經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化，有利于帶來(lái)最佳的結(jié)果和最低的背景。Amersham WB PVDF卡設(shè)計(jì)巧妙，可避免用戶誤操作，而濾紙也已經(jīng)切好，配合轉(zhuǎn)印架的設(shè)計(jì)，減少出錯(cuò)的可能。在關(guān)閉轉(zhuǎn)印架時(shí)，內(nèi)置的滾筒可以去除氣泡，增加重現(xiàn)性。內(nèi)置的冷卻也能保持恒定的溫度，避免過(guò)熱。

有了這一系列的措施，轉(zhuǎn)印也能夠高度重現(xiàn)，而不再需要擔(dān)心實(shí)驗(yàn)間的差異。同時(shí)，你也不需要一次又一次地重復(fù)實(shí)驗(yàn)，從而節(jié)省時(shí)間，節(jié)省經(jīng)費(fèi)。

第3步：雜交（155分鐘）

大家都知道，一抗很珍貴，因此都在想方設(shè)法少用一點(diǎn)。Amersham WB系統(tǒng)也能滿足你的這個(gè)愿望。系統(tǒng)的高靈敏度以及步驟和組件的優(yōu)化意味著你最多能節(jié)省50%的一抗。此外，一抗也能回收，用在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中。

封閉、洗滌、一抗和二抗孵育，這些繁瑣的操作都由系統(tǒng)自動(dòng)完成，而你所要做的只是加入一抗、二抗、封閉液和洗滌液，然后按下Start按鈕。之后，你就可以抽身去做其他的事，或者去吃飯。不放心的話，還能通過(guò)手機(jī)上的Amersham WB Watch app來(lái)遠(yuǎn)程監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過(guò)程。

第4步：檢測(cè)和成像（15分鐘）

低熒光背景的PVDF卡，經(jīng)過(guò)優(yōu)化的熒光標(biāo)記試劑，以及高性能的激光掃描儀，這些帶來(lái)了高質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)。因此，你可以靈敏檢測(cè)蛋白豐度的微小變化，分離和比較磷酸化與非磷酸化蛋白，并在同一塊印跡上準(zhǔn)確測(cè)定高豐度和低豐度蛋白。

德國(guó)癌癥研究中心的Martin Teichert談道：“因?yàn)樗�的�?dòng)態(tài)范圍很寬，所以不再有傳統(tǒng)ECL的所有限制。突然，我們就能比較之前無(wú)法比較的樣品。”

第5步：分析（1-2分鐘）

對(duì)于數(shù)據(jù)分析而言，軟件的方便好用至關(guān)重要。掃描一結(jié)束，Amersham WB軟件自動(dòng)開(kāi)展數(shù)據(jù)分析，通過(guò)柱狀圖、泳道圖和表格顯示關(guān)鍵信息。它能顯示所選擇泳道和條帶檢測(cè)結(jié)果，定量目標(biāo)蛋白相對(duì)雜質(zhì)的百分比，并利用總蛋白或內(nèi)參蛋白來(lái)歸一化目標(biāo)蛋白的信號(hào)。在你滿意了分析結(jié)果之后，也能輕松導(dǎo)出這些可立即發(fā)表的圖像和數(shù)據(jù)。

此外，Amersham WB軟件也提供多種應(yīng)用的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)方案，比如蛋白組成和豐度的快速篩選，比較樣品間蛋白質(zhì)水平的定量分析。屏幕左側(cè)顯示正在運(yùn)行的項(xiàng)目和參數(shù)，如有必要，可在屏幕右側(cè)修改實(shí)驗(yàn)方案的默認(rèn)參數(shù)。在整個(gè)Western blot過(guò)程中，大多數(shù)操作由儀器自動(dòng)完成，你只需要做少量的準(zhǔn)備工作，這個(gè)可以讓手機(jī)上的Amersham WB Watch app提醒你。

現(xiàn)在，你不再擔(dān)心Western blot的結(jié)果像抽獎(jiǎng)了吧。通過(guò)這臺(tái)智能的儀器，專屬的耗材和精心優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)方案，你可以獲得更加定量、更容易重現(xiàn)的Western blot數(shù)據(jù)。這樣，你就能少一些重復(fù)，少一些優(yōu)化，也少一些troubleshooting。關(guān)鍵是，對(duì)結(jié)果更有信心。（生物通 余亮）

我想了解Amersham WB系統(tǒng)的更多信息