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        2014創新產品:史上最快實時定量PCR系統

        Faster than Faster:qPCR 40個循環 < 10分鐘

        【字體: 時間:2015年01月28日 來源:生物通

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          40個循環 < 10分鐘,號稱史上最快實時定量PCR系統的xxpress在生物通2014年十大創新產品評選中遇冷并不意外,因為太新,資料少。但生物通編輯力排眾議將其列入十大創新產品之一,因為其創新之處確實令人眼前一亮,絕對值得往下看。

        人類對“更快,更強”的追求,絕不僅限于比賽場上,實驗室也不例外。

        40個循環 < 10分鐘,號稱史上最快實時定量PCR系統的xxpress在生物通2014年十大創新產品評選中遇冷并不意外,因為太新,資料少。但生物通編輯力排眾議將其列入十大創新產品之一,因為其創新之處確實令人眼前一亮,絕對值得往下看。

        升降溫速率,一向是各品牌熱循環系統(PCR/qPCR儀)宣傳戰中的頭牌參數,因其本職工作就是在變性/退火/延伸3個溫度之間往復循環。升降溫速率10℃/sec,xxpress固然很快,比主流品牌(最高升降溫速度5-6℃/sec左右)確實快,為啥人家40個循環下來至少都要35-40多分鐘,xxpress只要10分鐘呢?再說咱還聽過最快15℃/sec的呢,那個做40個qPCR循環至少還得25分鐘,為啥xxpress只要10分鐘呢?原來里面大有玄機!xxpress超高速循環主要因素,并非單純因為升降溫速率10℃/sec。

        PCR/qPCR反應都是由升溫變性,退火,延伸3個步驟循環組成。一般qPCR設計每步需要保持20-30秒或以上。以前一直就覺得奇怪,以最費時間的延伸步驟為例,qPCR擴增子通常就100多200bp大小,對于合成效率20-30秒/kb的Taq聚合酶來說5-6秒已經足夠從頭到尾合成一輪,多余的時間又不能干別的,為啥設計上要停留20-30秒呢?解鏈變性和退火這兩步單純熱力學不涉及酶反應的,200bp不到的片段更是應該就幾秒就夠了,哪需要糾纏20-30秒那么久?原來——

        PCR/qPCR一個循環周期時間取決于:
        • 升降溫速率
        • 達到目標溫度的溫度過沖
        • 穩定時間(傳統Peltier系統的溫度過沖的穩定時間約需要15-20sec。)
        • 停留時間 (這才是反應真正需要的時間)

        傳統96孔/48孔熱循環儀都有個“基座”,熱循環的每個周期,Peltier產生的熱量是通過熱量梯度的層層傳遞,從發熱板到金屬基板,再到基座金屬孔,再通過厚度至少達200um以上的樣品管壁,才能傳遞到液體試劑的。這種內在的層層傳遞降低了熱傳遞的效率。要加熱得更快,就需要更大的熱量梯度,溫度準確性和熱均一性就更差。

        為解決這個難題,那可是各出奇招。曾記否,當年高端大氣上檔次的黃金基座/純銀基座?雖然銀有著優異的導熱性,可整個銀基座質量過大,要改變整個基座溫度所需耗費能量必然就更高,需時就長。傳統Peltier系統的溫度過沖的穩定時間約需要15-20sec。癥結在此。

        當遵循熱力學法則的Peltier系統趨于接近熱性能極限,平衡已經向另一邊傾斜:降低熱質量,升降溫所需耗費的能量更少,加熱或者降溫更容易響應也更快。本來要加熱降溫的只是那么一點點體積的試劑么。

        xxpress拋棄了基座。但保持了大家熟悉的24/48/96孔陣列模式。就像Nanodrop拋棄比色皿,徹底改寫分光光度計。

        xxpress使用樣品板直接加熱——200um厚的鋁制xxplate板僅有幾克重,它既是一次性使用樣品板,本身又是一個復雜的多區域加熱元件,電流流經xxplate時進行直接加熱。xxplate內覆10μm厚的聚丙烯膜,液體樣品與加熱面只相隔這10μm厚的膜,熱量可直接地傳遞到樣品,這是提高樣品加熱準確性的關鍵因素。(等等,能不能用常規耗材96孔板?耗材得多貴?別急,后面算賬給你看)

        沒有基座,只有又輕又薄的樣品板直接加熱內里微量的樣品,總的熱質量少得多了,升降溫所需耗費的能量就少多了,加熱或者降溫當然更容易更快。在xxpress系統,每個循環的升降溫過程中的溫度過沖<0.5°C,穩定時間<0.5秒,幾可忽略不計,單一個循環就可以節省數十秒到1分鐘時間。

        整個循環過程升降溫速率10°C/秒,不僅僅是最大升降溫速率10°C/秒

        采用200μm厚、幾克重的反應板作為電阻加熱元件,形成極低電壓電路回路,可以直接傳遞準確的熱量。加上熱質量超低,熱傳導效率高,整個循環過程升降溫速率都能達到10°C/秒。

        控溫精度

        xxpress有9個非接觸式高精度紅外傳感器陣列,用于測量整塊反應板的溫度,業界唯一,無人能及。這種與英國國家物理實驗室合作開發的溫度測量和校準系統,將溫度測量精度的重復性提高到±0.05°C。而傳統的Peltier系統一般僅使用少數(2-3)的熱電偶測量金屬模塊的溫度。

        xxpress在循環全程實時測量溫度,根據溫度響應,控制算法決定加熱模式,和產生所需的熱量。xxplate板通過不同的電流路徑和不同的加熱模式,可實現分區域加熱控制,還有多區域控制多個獨立的空氣射流裝置控制冷卻,使得快速升降溫而不影響溫度的均一性。

        這種熱控制是快速動態的,控制算法以100次/秒頻率調整加熱模式。系統提供的溫度準確性好于±0.1°C;溫度均一性好于±0.3°C(測量針對反應板而非金屬基座)。

        立即索取xxpress定量PCR儀的資料或申請試用

        溫度過沖

        前面提及基座的質量大和層層熱傳遞效率低,使得Peltier系統的溫度過沖的穩定時間約需15-20秒。在xxpress系統,每個循環的升降溫過程中的溫度過沖<0.5°C,穩定時間<0.5sec,幾可忽略不計。因而在循環每一步都幾乎無溫度過沖調整,無需溫度穩定時間,能大大縮短停留時間。每步驟節省15-20秒,每個循環可節省40多秒,40個循環下來就很可觀了。你看,xxpress超高速循環并非單純靠升降溫速率高來實現。

        溫度均一性

        xxpress系統在循環全程實時測量溫度,所有樣品的溫度均一性在快速升降溫時好于±0.8°C,靜態溫度好于±0.3°C。這樣的控溫精度,即使在升降溫時確保所有樣品相同的溫度;確保樣品之間,實驗批次之間一致的和可比較的結果。而傳統的Peltier系統的內在設計和溫度測量方式,決定了其孔間差異和邊緣效應,不必再啰嗦。

        xxplate

        鋁制基板表面覆蓋超薄的聚丙烯層,保證樣品的完整性。
        3種板型,24孔,54孔和96孔,孔與孔為標準間距,可以使用標準的移液系統。
        無需更換任何硬件,即可更換使用不同板型。
        可以將不同尺寸的孔(1μL-500μL)做在一塊板上,也不會影響其性能

        板型   樣品量
        24孔  5-40μL
        54孔  5-15μL
        96孔  1-5μL

        消耗品太貴?XXplates專用耗材是比常規96孔板貴。鋁制基板表面覆超薄膜,單板報價達到10美元多點(折扣?砍吧,你懂的)。比10來塊錢的普通全塑板貴。不過因為反應體積縮小,能節約試劑,例如5μL體積相比20μL,試劑成本能削減75%,可達到比原來更節省的目的。他家網站還有個計算工具呢。

        考慮一下:
        1. 10分鐘內就能完成一輪定量,別人1小時剛做1輪半,你都能做完5輪反應了,一臺機器能頂人家好幾臺呢,這才是真正省了大頭費用呢,一臺機器可是幾萬美金。
        2. 沒有基座,更換不同板型是就不用換基座那么麻煩,更無需另外購買基座,一塊基座得好幾千呢;
        3. 無需維修成本——要知道,基座可算是熱循環儀里的“事故多發區”,維修工程師們最清楚了;花錢不算還耽誤時間呢;
        4. 沒有邊緣效應,xxplates每個孔都能安心用上,普通的96孔未必呢;還有縮小反應體積所節省的試劑費用呢!這樣想,是不是其實更省錢?

        其他你可能感興趣的參考信息

        熒光檢測系統:最多5個熒光通道同時檢測,適用于大多數染料和探針。

        系統:xxpress是一個開放的平臺,支持現有的所有實時PCR檢測化學,包括DNA結合染料,水解探針,雜交探針,以及其他檢測化學如分子信標和蝎子引物。

        硬件:xxpress是完全獨立的系統,使用觸摸屏,內置計算機,不需外聯。升降溫速率可調,最高為10°C/sec。LED的壽命比儀器壽命長。除濾光片輪外,xxpress光學系統部件在運行時無移位。

        軟件:xxpress軟件可以安裝在任何類型和任何數量的計算機上,通過廠家隨機提供的U盤安裝。xxpress軟件是多用戶的,提供密碼保護,xxpress運行文件很小(200-500 KB,40個循環),可以導出數據為多個*.CSV文件,可用于其他的分析軟件。目前系統不支持掃描條形碼。希望未來免費升級的軟件包括這項應用。可實行遠程的實驗計劃和結果分析,提高xxpress的利用率。

        儀器價格和主流定量PCR儀價格相當。遺憾的是這機器目前不帶HRM功能。不帶梯度。另外還有要留意的,除了專用板,首次購買需同時購買專用封膜機和離心機。因為太新的了,暫時沒啥文獻可查,好在基因有限公司提供Demo樣機,有興趣的帶樣品可以去試用。

        關于廠家背景,BJS公司建立于1945年,是一家英國的家族企業,提供高質量的精密電鑄,電鍍,銀器(包括英國皇室使用的銀器)和工業應用的精密電鑄部件。1991以來,BJS一直是世界領先的銀質熱交換模塊生產商,用于快速PCR儀,是第三代掌門人BJS主席Richard Lewis研發的。BJS公司在1996成立BJS 生物技術公司,創造發展超高速熱循環技術并將其應用于PCR。BJS 生物技術公司已被選定為參加由英國首相辦公室直接發起“創新英國”活動的公司之一。

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        2014生命科學十大創新產品揭曉

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