不充分的清洗和/或未過濾的封閉液導致背景有污點。使用0.2 μm Millex®-GP 針頭式過濾器來過濾封閉液，并增加清洗次數，可改善。

指紋    劃痕和鑷子痕跡    膜被折疊

轉移過程中膜和SDS-PAGE凝膠之間引入氣泡。

膠片上的負像（倒轉圖像）由過量的HRP結合二抗引起。將二抗稀釋度提高10倍可改善檢測。印跡左側是與1:5,000稀釋的二抗孵育，右側是與1:50,000稀釋的二抗孵育。

高背景和暗邊緣由印跡清洗不充分引起。增加或延長清洗，或使用高鹽清洗可緩解。

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