Western blot的原理雖簡單，但步驟多，過程長，往往需要反復(fù)優(yōu)化，才能獲得滿意的結(jié)果。過去，每個新人的Western blot經(jīng)歷，都是一段心酸的血淚史。在清晨踏著露珠出發(fā)，在夜晚頂著星星回家，只是為了在當(dāng)天看到Western blot的結(jié)果。然而，漂亮結(jié)果有時卻是千呼萬喚也不出來。這個時候，老板的臉色可真是不忍細(xì)看。

最近幾年，在Western blot領(lǐng)域，有不少新產(chǎn)品上市，它們能加快實驗進(jìn)程，將我們從繁重的體力勞動中解放出來，還能改善實驗結(jié)果。下面，就讓生物通帶你來看看這些“高端大氣上檔次”的產(chǎn)品，特別是后面兩種“神器”，關(guān)鍵時候也許能幫你一把。

35分鐘電泳

配膠，是Western blot萬里長征中的第一步。雖說現(xiàn)在的膠槽不斷改進(jìn)，配膠越來越方便，漏膠等“意外事故”也相對比較少發(fā)生了，但手工配制的凝膠過程仍然是一件不太穩(wěn)定不太均勻的事情，即使制膠過程每個步驟看起來都完美，跑膠后一看常常出現(xiàn)各種莫名其妙的條帶扭曲變形模糊拖尾等情況，還真讓人抓狂。有時間你盡管慢慢耗，對于稀有樣品或者時間緊迫條件下，即開即用的預(yù)制膠當(dāng)然是最好的選擇。

Life Technologies的Blot™ Bis-Tris Plus凝膠就是專為Western blot而設(shè)計，可讓您獲得更清晰的條帶。與傳統(tǒng)的Tris-甘氨酸凝膠不同，Bolt™ Bis-Tris Plus凝膠采用Bis-Tris-HCl緩沖液（pH 6.4），工作pH約為7.0。這種中性pH配合獨特而溫和的樣品制備實驗方案可使您的蛋白質(zhì)樣品始終處于溫和的非酸性條件，從而保護(hù)蛋白質(zhì)的完整性并最大程度減少對蛋白質(zhì)的修飾，確保每次均獲得高度靈敏且準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)印跡。

與經(jīng)典的NuPAGE預(yù)制膠一樣，Blot™ 預(yù)制膠具有極佳的條帶分辨率、條帶質(zhì)量，而批次間一致性就更不必說了，將手工制膠甩出幾條大街。有了Blot™ 預(yù)制膠，您將不再看到“笑臉”、斑點或拖尾，取而代之的將是sharp的條帶。。

有時，為了檢測低豐度蛋白，您需要上樣較多的樣品，當(dāng)然，這不能強(qiáng)求，因為上樣量過大，樣品會溢到相鄰孔中，造成污染。而對于Blot™凝膠，您就完全不必?fù)?dān)心了。它采用全新的專利楔形孔，使得每孔的蛋白上樣量增加了一倍。10孔的Blot™凝膠最多可上樣55 μL。

與Blot™凝膠配套使用的是Blot™ Mini電泳槽。這種電泳槽采用兩個并排的電泳槽結(jié)構(gòu)，可同時觀察兩塊凝膠，也更節(jié)約電泳緩沖液。同時，它采用新型的白色電泳槽底板，更方便觀察預(yù)染marker。利用Blot™ Mini電泳槽和Blot™凝膠，蛋白電泳可在35分鐘內(nèi)完成。而以前的配膠加電泳，至少需要兩個小時吧。另外，NuPAGE預(yù)制膠也是可以在Bolt槽上運(yùn)行的哦！

這么高大上的預(yù)制膠，看著雖然很美，但價格就不太美了。不過，如果趕上神馬促銷優(yōu)惠，還是挺劃算的。Life Tech有個迎新套裝，購買后即可免費獲贈Blot™ Mini電泳槽。

7分鐘轉(zhuǎn)印

以往，轉(zhuǎn)印需要數(shù)小時完成，而如今一些新儀器讓轉(zhuǎn)印時間大大縮短。Life Tech之前推出的iBlot® 干式轉(zhuǎn)印系統(tǒng)因7分鐘的轉(zhuǎn)印而大受歡迎，目前已有2000多篇文獻(xiàn)引用。正如一位研究人員所說：“之前，我們轉(zhuǎn)膜通常要花2小時以上，如今，7分鐘就完成了。我再也不用擔(dān)心不能按時回家了。”的確，一臺方便的儀器，不僅能快速帶來結(jié)果，也讓我們能享受到更多的家庭歡樂。

Western不再有壓力，半天輕松完成

如今，iBlot干式轉(zhuǎn)印系統(tǒng)已升級到第2代。iBlot 2在原有快速轉(zhuǎn)印系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，具有更加美觀和牢固的工業(yè)設(shè)計。它采用時下流行的觸摸屏設(shè)計，讓操作更加簡潔友好。儀器預(yù)設(shè)6種操作程序，當(dāng)然，您也可以根據(jù)目標(biāo)蛋白來自定義新程序，滿足不斷變化的實驗需求。

在轉(zhuǎn)印時，我們需要使用iBlot 2凝膠轉(zhuǎn)印膜組。這個膜組分頂部和底部兩個部分。頂部含銅質(zhì)陰極和iBlot陰極轉(zhuǎn)印膜組，而底部除了銅質(zhì)陽極和iBlot陽極轉(zhuǎn)印膜組外，還包含一張0.2 μm孔徑的NC膜或PVDF膜。這些膜組中已包含陰極和陽極緩沖液，無需配制緩沖液。電泳完成后，取出凝膠，組裝轉(zhuǎn)印膜組，趕走氣泡，即可開始轉(zhuǎn)印。只需7分鐘就能完成蛋白的高效轉(zhuǎn)移。與濕式或半干式轉(zhuǎn)印相比，時間更短，且檢測靈敏度更高。

iBlot 2轉(zhuǎn)印裝置適用于多種不同化學(xué)成分的預(yù)制膠或自制膠，并有兩種尺寸的轉(zhuǎn)印膜組可供選擇。您若是轉(zhuǎn)印一塊中型凝膠（8x13 cm）或兩塊微型凝膠（8x8 cm），可以選擇普通型轉(zhuǎn)印膜組。若是只有一塊微型凝膠，可以選擇迷你型轉(zhuǎn)印膜組。

怎么樣？心動了吧。還在為價格而猶豫？告訴您個好消息。即日起至2014年6月30日，購買1臺iBlot 2凝膠轉(zhuǎn)移儀，即可免費獲贈4盒轉(zhuǎn)印膜組（2盒普通型+2盒迷你型），PVDF或NC任選。抓住機(jī)會哦!

自動化封閉+孵育

到這里，Western blot最痛苦的階段似乎已經(jīng)過去，剩下便是按部就班的封閉、一抗和二抗孵育了。但每隔一兩個小時的換液，重復(fù)3次、每次3分鐘的洗滌也讓您脫不開身。若是有一臺儀器，能夠像面包機(jī)一樣，加入各種試劑，所有孵育和洗滌均能自動化完成，那可就太方便了。Life Tech果然推出了一款Western blot中的面包機(jī)——iBind™全自動蛋白印跡處理系統(tǒng)。

這臺儀器無需手工操作，即可重復(fù)、快速地自動完成Western blot中的封閉、一抗和二抗孵育及所有洗滌步驟，將您從繁雜的實驗操作中解放出來。同時，避免人為因素影響，提高實驗的可重復(fù)性。

iBind小巧輕便，大小僅為24.2 cm x 14.6 cm x 3.5 cm（長x寬x高），比iPad Mini略大一點。更為神奇的是，它不需要外部電源，在實驗室的任何地方都能使用。究竟是如何實現(xiàn)的呢？這要歸功于一種名為順序側(cè)流（Sequential Lateral Flow，簡稱SLF）的新技術(shù)。

在操作過程中，我們需要一種iBind™卡片。將iBind™卡片置于儀器中，并加入緩沖液后，將印跡膜放在卡片上，趕走氣泡。之后，依次加入抗體和溶液。SLF技術(shù)通過在iBind卡片上施加機(jī)械壓力，讓一抗和二抗及時釋放。iBind卡片內(nèi)嵌入的玻璃纖維使得抗體和洗滌液以恒定的速度流過印跡膜。而卡片一端的吸附膜組可以使液體流過卡片及膜。這樣，您加入試劑后即可離開，系統(tǒng)自動完成封閉、一抗和二抗孵育及所有洗滌步驟。

對于多種抗體而言，相對于手動方法，iBind系統(tǒng)帶來了更高的靈敏度，更低的背景，以及更佳的印跡間一致性。此外，實驗流程也大大縮短，從原來的十幾個小時縮短到2.5小時，而設(shè)置時間也僅需15分鐘。這些步驟完成后，印跡膜即可取出，利用Novex®化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒來進(jìn)行檢測。這一即用型試劑盒專為iBind而設(shè)計，可實現(xiàn)fg級的超靈敏檢測，且信號持續(xù)5天。

目前，Life Technologies提供iBind™起始套裝，內(nèi)含一臺iBind蛋白印跡處理儀、一盒iBind 卡片（10張）和一個iBind溶液試劑盒，讓您能立即開始操作。這個卡片和溶液都是耗材，之后還需購買。每張卡片可運(yùn)行一張迷你的膜。

如今，有了這一整套工具，Western blot不再是噩夢了吧。只需一上午的時間，我們就能從蛋白電泳、轉(zhuǎn)膜到印跡檢測，獲得準(zhǔn)確又可靠的結(jié)果。有了好的結(jié)果，還愁沒有好的paper嗎？（生物通 余亮）

Western不再有壓力，半天輕松完成