生物通報(bào)道 Sigma-Aldrich公司近日宣布推出Sigma CRISPRs，一款經(jīng)濟(jì)的哺乳動(dòng)物基因組編輯工具，適合篩選和探索性研究。這是繼鋅指核酸酶（ZFN）以來(lái)，Sigma推出的第二款基因組編輯工具。

CRISPR指的是規(guī)律成簇的間隔短回文重復(fù)（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）。CRISPR/Cas是在大多數(shù)細(xì)菌和古細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的一種天然免疫系統(tǒng)，可用來(lái)對(duì)抗入侵的病毒及外源DNA。Sigma CRISPRs利用可定制的RNA-核酸酶復(fù)合物來(lái)實(shí)現(xiàn)哺乳動(dòng)物基因組特定位點(diǎn)的編輯。

在細(xì)菌中，來(lái)自入侵病毒的短DNA序列（間隔區(qū)）被摻入CRISPR位點(diǎn)，充當(dāng)之前感染的“記憶”。再次感染引發(fā)互補(bǔ)的成熟CRISPR RNA（crRNA）找到匹配的序列，為CRISPR相關(guān)（Cas）核酸酶在特定DNA序列切割雙鏈提供了特異性。

Cas9是由crRNA和tracrRNA（反式激活crRNA）引導(dǎo)、切割特定DNA序列的核酸酶。引導(dǎo)RNA（gRNA）可設(shè)計(jì)成包含發(fā)夾結(jié)構(gòu)，以模擬tracrRNA-crRNA復(fù)合物。結(jié)合特異性是根據(jù)gRNA和三核苷酸NGG序列（protospacer adjacent motif，PAM）。對(duì)于位點(diǎn)特異的編輯，CRISPR/Cas9系統(tǒng)至少需要Cas9核酸酶和gRNA。

Sigma CRISPRs以單個(gè)質(zhì)粒載體提供，其中包含GFP，可快速富集編輯過(guò)的細(xì)胞。當(dāng)然，您也可以利用專(zhuān)門(mén)的生物信息學(xué)工具在線定制（www.sigma.com/crisprs）。

Sigma獨(dú)有的在線設(shè)計(jì)工具讓用戶(hù)可根據(jù)CRISPR/Cas靶定的要求，識(shí)別人、小鼠和大鼠外顯子中的最佳靶位點(diǎn)。它能夠自動(dòng)應(yīng)用CRISPR/Cas最佳設(shè)計(jì)實(shí)踐，包括靶位點(diǎn)與基因組中其他位點(diǎn)至少要求3個(gè)堿基對(duì)不匹配，從而最大限度減少了脫靶效應(yīng)。

“Sigma在2008年開(kāi)發(fā)出CompoZr ZFN技術(shù)，如今ZFN已成為基因組編輯的金標(biāo)準(zhǔn)。我們利用這一專(zhuān)長(zhǎng)創(chuàng)造出Sigma CRISPRs，它讓研究人員以更快、更經(jīng)濟(jì)的方式篩選目的基因。在利用Sigma CRISPRs 鑒定出重要靶點(diǎn)之后，可通過(guò)超特異的CompoZr ZFNs 來(lái)驗(yàn)證生物學(xué)上相關(guān)的突變，以減少潛在的脫靶，”Sigma Life Science功能基因組學(xué)市場(chǎng)部經(jīng)理Shawn Shafer博士談道。

Sigma-Aldrich研發(fā)部門(mén)的首席研究員Greg Davis博士認(rèn)為：“操控哺乳動(dòng)物基因組的能力對(duì)生物學(xué)而言是革命性的。Sigma CRISPR/Cas技術(shù)作為一款早期、經(jīng)濟(jì)的基因編輯工具，為開(kāi)發(fā)和使用帶來(lái)巨大希望�！保ㄉ�物通 余亮）

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