生物通報道 Sigma-Aldrich公司近日宣布推出Sigma CRISPRs，一款經濟的哺乳動物基因組編輯工具，適合篩選和探索性研究。這是繼鋅指核酸酶（ZFN）以來，Sigma推出的第二款基因組編輯工具。

CRISPR指的是規律成簇的間隔短回文重復（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）。CRISPR/Cas是在大多數細菌和古細菌中發現的一種天然免疫系統，可用來對抗入侵的病毒及外源DNA。Sigma CRISPRs利用可定制的RNA-核酸酶復合物來實現哺乳動物基因組特定位點的編輯。

在細菌中，來自入侵病毒的短DNA序列（間隔區）被摻入CRISPR位點，充當之前感染的“記憶”。再次感染引發互補的成熟CRISPR RNA（crRNA）找到匹配的序列，為CRISPR相關（Cas）核酸酶在特定DNA序列切割雙鏈提供了特異性。

Cas9是由crRNA和tracrRNA（反式激活crRNA）引導、切割特定DNA序列的核酸酶。引導RNA（gRNA）可設計成包含發夾結構，以模擬tracrRNA-crRNA復合物。結合特異性是根據gRNA和三核苷酸NGG序列（protospacer adjacent motif，PAM）。對于位點特異的編輯，CRISPR/Cas9系統至少需要Cas9核酸酶和gRNA。

Sigma CRISPRs以單個質粒載體提供，其中包含GFP，可快速富集編輯過的細胞。當然，您也可以利用專門的生物信息學工具在線定制（www.sigma.com/crisprs）。

Sigma獨有的在線設計工具讓用戶可根據CRISPR/Cas靶定的要求，識別人、小鼠和大鼠外顯子中的最佳靶位點。它能夠自動應用CRISPR/Cas最佳設計實踐，包括靶位點與基因組中其他位點至少要求3個堿基對不匹配，從而最大限度減少了脫靶效應。

“Sigma在2008年開發出CompoZr ZFN技術，如今ZFN已成為基因組編輯的金標準。我們利用這一專長創造出Sigma CRISPRs，它讓研究人員以更快、更經濟的方式篩選目的基因。在利用Sigma CRISPRs 鑒定出重要靶點之后，可通過超特異的CompoZr ZFNs 來驗證生物學上相關的突變，以減少潛在的脫靶，”Sigma Life Science功能基因組學市場部經理Shawn Shafer博士談道。

Sigma-Aldrich研發部門的首席研究員Greg Davis博士認為：“操控哺乳動物基因組的能力對生物學而言是革命性的。Sigma CRISPR/Cas技術作為一款早期、經濟的基因編輯工具，為開發和使用帶來巨大希望。”（生物通 余亮）

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