對于整天和細胞打交道的研究人員來說，熒光顯微鏡可是不可或缺的研究工具。通過它，可直接觀察熒光蛋白的表達，了解細胞活力等狀況。然而，此平臺也并非完美。談到定量檢測，它就無能為力了，只能依靠主觀判斷，結果基本靠猜。流式細胞儀倒是能提供精確的統計數據，但卻沒有成像功能。

為此，Life Technologies公司推出了一款與眾不同的細胞分析儀——Tali™成像型多色細胞分析儀（圖1）。看到這款儀器，你是不是馬上聯想起Countess® 自動細胞計數儀？雖說它們兩個都好像一瓣西瓜，但Tali™的功能要多得多呢。它是一款3通道（明場、綠色熒光、紅色熒光）的臺式分析平臺，可開展快速、定量的GFP和RFP表達、凋亡和細胞活力分析。現在是時候和猜測說byebye了，因為Tali提供了懸浮細胞群體中熒光表達的精確統計信息。

 
圖1. Tali™成像型多色細胞分析儀

借助Tali™圖像型細胞儀，您可簡便、快速地開展各種實驗，比如快速分析GFP/RFP載體的轉染效率，鑒定GFP或RFP陽性的細胞，利用annexin V和PI開展凋亡分析，鑒定細胞活力等。儀器小巧，可以方便地在您的實驗室里找到容身之所。

它的優點還包括：
 功能多樣——輕輕一觸即可完成細胞成像和細胞測定
 準確——提供大量細胞分析數據，用于統計學顯著性分析
 快速——每個樣品僅需約1分鐘時間即可完成三參數群體分析

而對于流式細胞儀用戶，在使用流式設備對樣品進行分析和分選前，您可使用Tali™圖像型細胞儀快速檢測樣品的濃度和熒光，從而提高檢測效率。

只需25 μL樣品，Tali™成像型多色細胞分析儀就能在10至75秒時間內完成一次常規細胞群體分析。除明場通道外，Tali™成像型多色細胞分析儀還有兩條熒光通道 (綠色和紅色)，因此可同時計數綠色和/或紅色熒光染色細胞以及表達GFP和RFP的細胞。此分析儀還能提供全面的數據和圖形格式報告，并可導出數據，進行存檔和樣品比較。

Tali™成像型多色細胞分析儀采用直觀的用戶界面，使整個分析過程非常簡單，只需6步：1. 選擇分析；2，在玻片上加入細胞；3. 將玻片插入Tali™細胞分析儀中；4. 調整焦距；5. 按下運行；6. 即可收集并分析數據。分析過程介于10秒和120秒之間，這取決于視場數量和分析的復雜程度。

在分析過程中，Tali™成像型多色細胞分析儀掃描Tali™細胞分析玻片，收集20個視場的明場和熒光圖像。對于1×106個細胞/mL的樣品，每個視場大約包含5000個細胞。利用一臺高靈敏度的照相機和一種圖像處理和分析算法，Tali™成像型多色細胞分析儀能夠以定量的方式捕獲最微弱的信號，并以圖形格式顯示相關數據，比如細胞數 vs. 細胞大小，細胞數 vs. 熒光。

所有Tali分析都共享相同的流程和用戶界面，不同的是內部算法所收集和分析的熒光通道。在每次運行之前，用戶可通過觸摸屏，選擇收集的視場數（4、9、13、18或20）。在每個視場，Tali™成像型多色細胞分析儀捕獲明場和熒光圖像，之后利用圖像分析算法計算整個細胞群體，并挨個確定細胞的熒光特征。它的算法不僅能區分單細胞和簇，還能根據簇面積和細胞平均大小來確定細胞數量。這下，不必擔心搞不清單細胞和細胞簇了。

作為一個定量檢測的平臺，Tali™細胞分析儀的數據是否可靠呢？研發人員將此平臺所產生的結果與高端的流式細胞儀進行了比較。他們發現，對于每種分析（凋亡、細胞活力、熒光蛋白表達）以及所檢測的細胞類型，兩個平臺的結果是相當的（圖2）。

 
圖2. 在Tali™成像型多色細胞分析儀和流式細胞儀上分析細胞活力的比較。他們測定了五種不同細胞類型（Jurkat、U20S、293MSR、HEKn和CHO-S）的細胞活力。利用Tali™ Viability Kit對細胞染色，之后利在Tali™成像型多色細胞分析儀或流式細胞儀上測定。對于所有細胞類型，兩種平臺的結果是相當的。

目前，研發人員已經在Tali™成像型多色細胞分析儀上檢驗了13種細胞類型，包括：293 MSR、A431、A549、BPAEC、CHO-M1、HASMC、HDFN、HeLa、HEKn、JKT、MMM、NIH-3T3、U2OS。有了它，您可以輕松自信地開展多種細胞分析，再也不用靠猜了。

GFP/RFP分析

Tali™成像型多色細胞分析儀確定樣品中發出綠色或紅色熒光的細胞，以及未染色和不發熒光的細胞。同時，GFP/RFP分析可與活力分析結合起來。利用Tali™ Viability Kit – Dead Cell Red可確定表達綠色熒光蛋白的細胞，而Tali™ Viability Kit – Dead Cell Green可確定表達紅色熒光蛋白的細胞。

凋亡

在凋亡分析中，利用Tali™成像型多色細胞分析儀可區分凋亡細胞、死細胞和活細胞。使用Tali™ Apoptosis Kit – Annexin V–Alexa Fluor  488 and propidium iodide，可以對每種細胞群體進行計數，并計算它們在樣品中的相對量。

細胞活力

Tali™成像型多色細胞分析儀可確定活細胞和死細胞的數量及比例。正如上面提到的Tali™ Viability Kit – Dead Cell Red，它將死細胞染成紅色。

快速計數

Tali™成像型多色細胞分析儀還能一個頂倆，當成Countess使，快速準確地進行細胞計數，而無需染色細胞。Tali™也能確定樣品中的細胞濃度和平均大小。

當然，除了這些Life Tech開發出的分析，任何熒光染料或蛋白，只要能在綠色（FITC、Alexa Fluor 488等）或紅色（RFP、PI等）熒光通道檢測，就可用Tali™成像型多色細胞分析儀進行分析。如果你不太確定，可利用SpectraViewer在線工具查看（www.invitrogen.com/spectraviewer）。

如果您想了解Tali細胞分析儀的更多信息，請點擊此處索取。（生物通 余亮）