細(xì)胞骨架蛋白（包括肌動(dòng)蛋白和大量相關(guān)蛋白）的變化涉及細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、增殖等重要功能，也是細(xì)胞周期調(diào)控和癌轉(zhuǎn)移研究中的熱點(diǎn)。要評(píng)估肌動(dòng)蛋白及其相互作用蛋白，藥物處理帶來細(xì)胞骨架的改變，首先要求特異性、溫和地制備細(xì)胞骨架組分，消除細(xì)胞其它成分對(duì)檢測的干擾。

然而，要做到這一點(diǎn)并不容易，因?yàn)榧?xì)胞骨架不溶于傳統(tǒng)去污劑（Triton-X100）。多年的研究也表明，許多肌動(dòng)蛋白調(diào)控蛋白/磷酸化蛋白一旦激活，會(huì)從可溶的胞質(zhì)區(qū)移動(dòng)到不溶的細(xì)胞骨架。這些重要蛋白不溶，問題就變得棘手，如何研究它們的生化改變，如磷酸化和亞硝基化？

為此，默克密理博新開發(fā)上市了兩款專門富集細(xì)胞骨架的產(chǎn)品。提到蛋白的樣品制備，默克密理博可是專家。它旗下的Calbiochem、Novagen和密理博都提供了多個(gè)產(chǎn)品，既能專門抽提某一特定組分，例如細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞器（如線粒體）蛋白等，也可借助特殊配方從一批起始材料分步驟地獲得胞質(zhì)/膜/胞核/骨架蛋白的亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組抽提等。

ProteoExtract 細(xì)胞骨架富集及分離試劑盒（ProteoExtract Cytoskeleton Enrichment and Isolation kit）提供了細(xì)胞骨架提取緩沖液，可保留非變性粘著斑和肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白，并選擇性去除可溶的細(xì)胞質(zhì)和核蛋白組分。抽提得到的活性細(xì)胞骨架蛋白可用于Western Blot分析，看看某特定蛋白是否出現(xiàn)在細(xì)胞骨架組分中，用于蛋白的細(xì)胞定位分析。此試劑盒大大提高了低豐度肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白的檢測和研究能力，而之前這些蛋白一般淹沒在全細(xì)胞裂解液的Western blot中。此產(chǎn)品可用于15次反應(yīng)。

ProteoExtract 細(xì)胞骨架富集及分離試劑盒（ProteoExtract Native Cytoskeleton Enrichment and Staining Kit）溫和去除雜蛋白，富集骨架蛋白/相關(guān)蛋白，進(jìn)行原位IF（免疫熒光）染色，大大減少了背景蛋白的干擾。試劑盒中還提供了Vinculin和GAPDH的抗體，便于免疫熒光研究。此產(chǎn)品可用于4個(gè)8-well chamber slides實(shí)驗(yàn)。

圖中展示了未處理以及用ProteoExtract 細(xì)胞骨架富集及分離試劑盒處理過的HeLa細(xì)胞的共聚焦熒光顯微鏡圖像。(A) 利用TRITC結(jié)合的Phalloidin檢測F-actin；(B) 用GAPDH抗體和FITC結(jié)合的二抗檢測細(xì)胞質(zhì)蛋白，這作為陰性對(duì)照；(C) 核復(fù)染和所有圖像疊加。利用ProteoExtract試劑盒，成功去除了可溶的細(xì)胞質(zhì)蛋白組分（GAPDH）。

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