細(xì)胞生物學(xué)研究中，真實(shí)的細(xì)胞圖像是非常寶貴有用的資源。要想獲得細(xì)胞圖像，研究人員就必須使用顯微鏡進(jìn)行觀察，但顯微鏡能夠觀察的細(xì)胞數(shù)量非常有限，很難提供細(xì)胞群體的量化與統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

使用傳統(tǒng)的流式細(xì)胞檢測技術(shù)，研究人員可以分析成千上萬個細(xì)胞，獲得每個細(xì)胞的散射光信號和熒光信號的數(shù)值，從而得到細(xì)胞群體的各種統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，并找到稀有的細(xì)胞亞群。然而，對于研究人員來說傳統(tǒng)的流式細(xì)胞儀最大的局限性之一在于：細(xì)胞只是散點(diǎn)圖上的一個點(diǎn)，而不是真實(shí)的細(xì)胞圖像，缺乏細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞結(jié)構(gòu)及亞細(xì)胞水平信號分布的相關(guān)信息。

顯微成像觀測到的細(xì)胞數(shù)量太有限、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析太繁瑣；而流式細(xì)胞術(shù)又無法觀測細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，無法定位熒光信號到特定部位。大家常想，若是有一臺儀器能將兩者結(jié)合起來，那可就perfect了。如今，這臺儀器真的上市了，它就是美國Amnis公司近日推出的FlowSight顯微成像流式細(xì)胞儀！且看生物通編輯為您介紹這臺創(chuàng)新的兼具顯微成像功能的流式細(xì)胞儀。

FlowSight顯微成像流式細(xì)胞儀不僅能夠獲得大量細(xì)胞的群體分析數(shù)據(jù)，而且還能夠?qū)崟r(shí)看到細(xì)胞圖像，每一步的分析結(jié)果都可以通過圖像進(jìn)行確認(rèn)。這臺顯微成像流式細(xì)胞儀可能會給傳統(tǒng)細(xì)胞分析帶來突破性的變革。

既是流式細(xì)胞儀

FlowSight是一款體積小巧，但是功能強(qiáng)大的成像流式細(xì)胞儀。該系統(tǒng)革命性的設(shè)計(jì)提高了信噪比以及熒光檢測的靈敏度。標(biāo)配12個檢測通道能夠同時(shí)獲得每個細(xì)胞的明場、暗場以及至多10個熒光圖像。而且，它功能非常強(qiáng)大，足以勝任核心實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用需要。同時(shí)，該系統(tǒng)體積小巧，性價(jià)比高，同樣也適合小型實(shí)驗(yàn)室。FlowSight可以最多配置四根激光管（405, 488, 561, 642 nm），同時(shí)還可配置96孔板自動上樣系統(tǒng)（AutoSampler）。

又不僅僅是流式細(xì)胞儀

FlowSight與其他傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀不同之處在于它帶來了每個細(xì)胞的真實(shí)圖像。對于每個細(xì)胞，它能夠生成12張圖片。所獲得的圖片能夠鑒別來自細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜和細(xì)胞核的熒光。您只需點(diǎn)擊散點(diǎn)圖中的每個點(diǎn)或直方圖中的每個bin，即可查看與之對應(yīng)的細(xì)胞圖片。因此使用者再也不用靠猜測來判斷設(shè)門是否準(zhǔn)確。在FlowSight中，設(shè)門后，使用者可以通過觀察所設(shè)門內(nèi)外的細(xì)胞圖片來確認(rèn)設(shè)門是否準(zhǔn)確。

它是如何實(shí)現(xiàn)的？

FlowSight技術(shù)與傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀很類似，其系統(tǒng)平臺也是由液流系統(tǒng)，光學(xué)系統(tǒng)和電子系統(tǒng)等三大部分組成。液流系統(tǒng)將樣本細(xì)胞懸液和系統(tǒng)鞘液注入流動室中，使細(xì)胞在鞘液流的約束下聚焦在液流的中心，逐個流過檢測窗口。光學(xué)系統(tǒng)中光源照射通過檢測窗口的細(xì)胞，從而產(chǎn)生光信號。光源分為兩種，其一用于產(chǎn)生明場細(xì)胞圖像，另一種是用于產(chǎn)生熒光細(xì)胞圖像的激光器。光源照射細(xì)胞產(chǎn)生的光信號被大數(shù)值孔徑的物鏡收集，然后通過光路系統(tǒng)傳遞到由二向色鏡構(gòu)成的濾光片堆棧（Dichroic Filter Stack）。光信號在這里被分成不同波段投射到CCD的相應(yīng)檢測通道上，產(chǎn)生一個明場細(xì)胞圖像，一個暗場細(xì)胞圖像（Side Scatter，SSC）及至多10個不同熒光通道的細(xì)胞圖像。FlowSight的光路系統(tǒng)能夠自動調(diào)整焦距，并實(shí)時(shí)測定細(xì)胞運(yùn)動速度，而其CCD采用時(shí)間延遲積分方式（Time Delay Integration，TDI）進(jìn)行信號采集，上述這些手段保證了系統(tǒng)采集到的細(xì)胞圖像的質(zhì)量。

FlowSight的新穎應(yīng)用

FlowSight顯微成像流式細(xì)胞儀結(jié)合了流式細(xì)胞檢測功能與熒光顯微成像功能，并整合了功能強(qiáng)大的軟件，幾乎可應(yīng)用于細(xì)胞分析的所有領(lǐng)域。下面列舉一些FlowSight的新穎應(yīng)用。

1. 細(xì)胞周期分析
FlowSight可以將細(xì)胞周期分析和有絲分裂細(xì)胞分析結(jié)合起來。如下圖所示，研究人員利用FlowSight對THP-1細(xì)胞周期進(jìn)行分析（如下圖左圖所示），通過觀察每個時(shí)期的細(xì)胞圖片，我們可以對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)（下圖右圖所示）。

2. 八色免疫分型
免疫分型通常用來鑒別血細(xì)胞亞群。FlowSight最多能夠同時(shí)檢測10色熒光，最大程度地滿足研究者的實(shí)驗(yàn)需求。在這個例子中，研究人員用抗CD45, CD14, CD16, CD19, CD3, CD4和 CD123的抗體以及DAPI染料對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。通過一系列設(shè)門分析，他們鑒別了以下細(xì)胞類群： (A) CD3+ T細(xì)胞, CD4+ 輔助T細(xì)胞; (B) CD16+ 粒細(xì)胞; (C) CD19+ B 細(xì)胞; (D) CD14+ 單核細(xì)胞; (E) CD123+ pDC/嗜堿性粒細(xì)胞.

您瞧，F(xiàn)lowSight革命性的技術(shù)，解決了傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀無法獲得細(xì)胞形態(tài)信息的局限，真正讓流式細(xì)胞儀睜開了“眼睛”，不僅可以對大量細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，而且還能觀察細(xì)胞形態(tài)，極大地拓展了傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀的應(yīng)用。雖然FlowSigh是在今年5月推出的，但是Amnis公司的成像流式技術(shù)已經(jīng)非常成熟，更高性能的ImageStreamX全球裝機(jī)已經(jīng)超過100臺，也有上百篇文獻(xiàn)發(fā)表，其中不乏Nature、Science和Blood等高水平文章。

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