Western blot總是離不開一對(duì)抗體兄弟——蛋白特異的一抗和物種特異的二抗。至于二抗上的標(biāo)記，過去以辣根過氧化物酶居多。辣根過氧化物酶與顯色底物相互作用，在膜上顯出肉眼可見的條帶。這種分析簡(jiǎn)單、靈敏，應(yīng)用廣泛，但是它不能定量�；瘜W(xué)發(fā)光法的靈敏度更佳，且動(dòng)力學(xué)范圍更大，利于定量。但它的缺陷是信號(hào)很短暫，所有研究都必須在有限的時(shí)間內(nèi)完成。

許多實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在開始對(duì)熒光標(biāo)記的抗體表現(xiàn)出濃厚的興趣。這種抗體能夠直接檢測(cè)，靈敏度高，且信號(hào)持久。綠色、紅色的抗體已不稀奇，LI-COR公司還提供近紅外染料結(jié)合的IRDye® 二抗，熒光發(fā)射波長(zhǎng)分別為680 nm和800 nm。這樣就能同時(shí)檢測(cè)兩個(gè)蛋白，而不需要?jiǎng)冸x、再孵育。這些抗體能夠更準(zhǔn)確地定量，線性范圍比化學(xué)發(fā)光更寬，超過4個(gè)數(shù)量級(jí)。近紅外范圍的背景低，信噪比更高。而且這些標(biāo)記特別穩(wěn)定，能保持好幾年。

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近紅外染料標(biāo)記的抗體為印跡形式增添了靈活性。LI-COR的產(chǎn)品經(jīng)理Tony Endozo談到：“我們的用戶非常具有創(chuàng)新性。主要的應(yīng)用當(dāng)然是Western blot，不過我們還可以進(jìn)行細(xì)胞分析，In-Cell Western，在整個(gè)細(xì)胞的背景下分析目的蛋白。”這個(gè)過程包括培養(yǎng)細(xì)胞，然后直接放在板上分析，而不需要裂解細(xì)胞或變性蛋白。In-Cell Western很容易擴(kuò)大到96或384孔板的高通量分析。另外，LI-COR還提供了Chemi-IR試劑，它結(jié)合了化學(xué)發(fā)光的HRP步驟和IRDye檢測(cè)系統(tǒng)，將它們的優(yōu)勢(shì)合二為一。

轉(zhuǎn)印儀器上同樣有新選擇。Pierce（Thermo Fisher Scientific）推出了快速半干式轉(zhuǎn)印儀，能夠迅速將蛋白或核酸從凝膠上轉(zhuǎn)移至PVDF或硝酸纖維素膜上。與Pierce的快速半干式轉(zhuǎn)移緩沖液共同使用，能在7-10分鐘內(nèi)完成高效的蛋白轉(zhuǎn)印，與傳統(tǒng)的45分鐘相比，真是快了一大截。快速半干式轉(zhuǎn)印的主要優(yōu)勢(shì)在于緩沖液消耗量減少，電場(chǎng)更均勻，轉(zhuǎn)移效率高，時(shí)間更快。Pierce快速半干式轉(zhuǎn)印儀一次能轉(zhuǎn)4塊mini-gel，通量比其他方法更高。當(dāng)然，這個(gè)儀器也能進(jìn)行傳統(tǒng)的半干式轉(zhuǎn)印，用你自己的緩沖液和protocol。想了解更多嗎？請(qǐng)點(diǎn)擊此處。

Pierce快速半干式轉(zhuǎn)移緩沖液的配方經(jīng)過優(yōu)化，適于快速的轉(zhuǎn)移。它是10×的配方，使用前用超純水稀釋即可，也無(wú)需加入甲醇，更安全。它適用于大部分SDS-PAGE的凝膠，包括Tris-甘氨酸、Bis-Tris、Tris-HEPES和Tris-HCl。

Invitrogen在幾個(gè)月前也推出了iBlot Western檢測(cè)試劑盒，它與iBlot干轉(zhuǎn)儀搭檔，能將western檢測(cè)從3小時(shí)縮短到25分鐘。詳細(xì)請(qǐng)看：25分鐘完成Western檢測(cè)？！看來，時(shí)間也不再是Western blot最大的糾結(jié)了。

（生物通 余亮）