簡介

人們嘗試過很多方法將質粒DNA導入細胞，常用的有DEAE右旋糖苷，磷酸鈣沉淀，脂質體，顯微注射和電擊等物理方法。現有的轉染技術都或多或少的有各種不足，其中轉染效率低，細胞毒性高是研究者最常遇到的困擾；而許多細胞系，特別是原代細胞是很難獲得理想的轉染效果的。現有的轉染試劑產品在應用中還有一個普遍的問題，就是不太可能采用單一一種試劑在各種細胞上都獲得較高轉染效率；因此研究者不得不嘗試很多種類的轉染試劑而獲得特定細胞的最佳轉染效果。如果某種轉染試劑盒可以在各種細胞——包括哪些“抗拒轉染”的細胞¬——的轉染實驗中都能獲得好結果，對于廣大研究者來說將是一個福音。

為了達到研究者的這種期望，默克Novagen經驗豐富的研究團隊開發了NanoJuice™轉染試劑盒，其兩種組分互相促進，可以提高各種哺乳動物細胞的轉染效果。采用最新的納米科學技術Priostar® dendrimers（樹枝狀聚合物） 和多價陽離子脂質體的特別設計，NanoJuice轉染試劑混合物可以確保獲得卓越的轉染效率而細胞毒性極低。這種新的轉染方法會幫助研究者在原代細胞和那些“頑固抵抗轉染”的細胞上輕易獲得成功。NanoJuice試劑盒中的兩種試劑經過調節配比，很方便為不同的細胞設定最佳轉染效果的使用方法。有了NanoJuice轉染試劑盒就再也不需要不斷地為每一種細胞從頭摸索不同轉染方法或嘗試各種產品了。我們建議您采用預試驗為特定的細胞找到最佳試劑用量，通常這個小試可以在24孔板中進行；一旦最優化的轉染試劑用量確定了，后續的操作可以在此基礎上非常方便地用等比縮放來輕松獲得穩定的高效轉染。

確定最佳轉染條件預實驗

我們在一些原代細胞和其它較難轉染的細胞上做了預試驗，以便摸索試劑的最佳用量和配比。每個試驗設定6種條件，包括每ug DNA采用2種不同用量的NanoJuice核心轉染試劑和4種不同用量的轉染增強試劑（圖1）。通常，NanoJuice的最適使用量范圍是：核心轉染試劑1-2ul / ug DNA，轉染增強試劑1-4ul / ug DNA。預試驗結果顯示，每種細胞的最佳轉染效果采用的兩種轉染試劑成分的比例可能差別甚大（圖2）。我們的嘗試表明每一種細胞均需設置預試驗以獲得最優化的實驗條件，同時這些數據也證明了NanoJuice™轉染試劑盒是一種多功能轉染工具，可以作為各種細胞高效轉染的首選。不斷在各種細胞上嘗試NanoJuice轉染試劑盒發現其兩種試劑成分的用量可以根據不同細胞的實際情況有更大幅度的調整。例如：Caco-2細胞的預試驗中，NanoJuice核心轉染試劑和轉染增強試劑都是1ul / ug DNA。而進一步的嘗試發現兩種試劑的用量可以更低一些，分別為1ul和0.75ul，而轉染效率有小幅提高（圖3）。

圖1 確定最佳轉染條件的預實驗，嘗試8種轉染核心試劑與轉染增強試劑的不同配比，每種做3個重復。

圖2 預實驗
轉染前18-24h在24孔板接種細胞，轉染時細胞融合度為60-90%。每3個重復的孔需準備：核心轉染試劑0.9-1.8ul，轉染增強試劑0.9–3.6ul，在70ul無血清培養基中稀釋，室溫孵育5min。圖中標明每ug DNA所采用的NanoJuice核心轉染試劑和轉染增強試劑的不同用量（ul）。轉染采用克隆了Renilla熒光素酶報告基因的pTriEx-5重組子，每孔DNA用量為0.9ug。質粒上帶有CMV啟動子，N端Strep•Tag® II標簽，Rluc報告基因和C端His•Tag®標簽。轉染混合物在室溫下孵育15min。每孔加入轉染混合物20ul。24-72h后，以100ul Reportasol™試劑抽提。10ul細胞抽提液中Rluc的活性采用試劑盒MightyLight™ 分析。統計每孔相對光單位(RLU/well)，3個重復取平均值。

圖3 進一步優化實驗
轉染前18-24h在24孔板接種細胞，轉染時細胞融合度為60-90%。每3個重復的孔需準備：核心轉染試劑0.68-0.9ul，轉染增強試劑0.45–0.9ul，在70ul無血清培養基中稀釋，室溫孵育5min。圖中標明每ug DNA所采用的NanoJuice核心轉染試劑和轉染增強試劑的不同用量（ul）。用于轉染的報告重組子同圖2實驗，每孔DNA用量為0.9ug。轉染混合物在室溫下孵育15min。每孔加入轉染混合物20 ul。48h后，以100ul Reportasol™試劑抽提。10ul細胞抽提液中Rluc的活性采用試劑盒MightyLight™ 分析。統計每孔相對光單位（RLU/孔），3個重復取平均值。

卓越的轉染效果

分別確定了NanoJuice試劑的最佳用量和配比后，我們嘗試在后續實驗中，分別轉染了Saos-2，Caco-2，Raw264.7，Jurkat和動脈平滑肌細胞。同時以市售的其它轉染試劑做對照（按廠家提供的產品說明書操作），實驗結果（圖4）顯示，由優化的NanoJuice混合試劑轉染的細胞表達Renilla 熒光素酶的產量明顯高于其它轉染方法。另外，我們也比較了NanoJuice與GeneJuice®轉染試劑對于Caco-2，Raw264.7和Saos-2細胞系的轉染效果（圖5）。對于那些轉染較為困難的細胞系，NanoJuice轉染試劑盒獲得的Renilla 熒光素酶表達產量均高于GeneJuice轉染試劑。

圖4 NanoJuice與其它轉染試劑的比較
轉染前18-24h在24孔板接種細胞，轉染時細胞融合度為60-90%。轉染操作按廠家說明書進行。用于轉染的報告重組子同圖2實驗，NanoJuice轉染試劑采用圖2實驗中確認的每種細胞的相應最佳用量。（圖中顯示每ug DNA所用的兩種NanoJuice試劑用量ul）24–48h后, 以100ul Reportasol™試劑抽提。10ul細胞抽提液中Rluc的活性采用試劑盒MightyLight™ 分析。統計每孔相對光單位（RLU/孔），3個重復取平均值。

圖5 NanoJuice與GeneJuice轉染“困難”細胞的結果比較
兩種來自Novagen的DNA轉染試劑用于轉染Caco-2，Raw264.7和Saos-2細胞。轉染前18-24h在24孔板接種細胞，轉染時細胞融合度約為80%。按圖2和4的條件轉染。兩種NanoJuice試劑的用量采用圖2實驗的最佳用量。3個重復取平均值。

細胞毒性討論

成功轉染的另一個關鍵是細胞毒性低。細胞受損的表現包括形態上變圓或細胞不再貼壁等。轉染48小時后拍攝的照片中Saos-2細胞非常健康，在同類產品中細胞毒性最低（圖6）。

圖6 毒性比較
NanoJuice轉染，其它轉染試劑轉染和無轉染陰性對照的細胞毒性比較。采用Saos-2細胞轉染，每實驗3個重復。轉染48h后拍照。
左上：陰性對照；右下：NanoJuice轉染；
下圖為兩種常見市售轉染試劑的細胞毒性實驗。

小結

NanoJuice轉染試劑盒易于優化而獲得各種細胞的最佳轉染效果，包括那些原代培養細胞和轉染極為困難的細胞。同時，NanoJuice轉染試劑細胞毒性很低，與含有或沒有血清的培養基兼容，適用于穩定轉染和瞬時轉染，操作簡便而不需要更換培養基。該產品采用無動物源性生產，保障您在嚴格限制動物來源試劑領域的使用。

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• 71902-3國內備有現貨
  
• NanoJuice轉染核心試劑和轉染增強試劑可單獨購買，貨號分別為71900和71901。
  
• 提供中英文說明書
  
• 默克Novagen的NanoJuice正在進行“挑戰新細胞轉染”案例召集活動，歡迎垂詢400 820 8872。