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一種不用液氮研磨,快速制備各種組織基因組DNA并進行PCR方法[新品推薦]
【字體: 大 中 小 】 時間:2009年10月27日 來源:Tiangen
編輯推薦:
采用獨特創新的緩沖體系,本方法包含了快速制備基因組DNA和PCR擴增的所有試劑,適用于從植物組織、植物種子、動物組織/細胞、細菌和血液等材料中一步法提取基因組DNA并用于PCR擴增。
摘要:
創新的溶液配方,實驗樣本無需液氮研磨,僅10mg樣本一步裂解20分鐘即可獲得各種組織基因組DNA并進行PCR實驗,提速基因組DNA提取與PCR實驗進程!
采用獨特創新的緩沖體系,Tiangen公司的快速DNA提取擴增套裝包含了快速制備基因組DNA和PCR擴增的所有試劑,適用于從植物組織、植物種子、動物組織/細胞、細菌和血液等材料中一步法提取基因組DNA并用于PCR擴增。整個提取過程無需液氮研磨,無需有機溶劑抽提,無需乙醇沉淀,具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩定性好等特點,特別適合于高通量的篩選如轉基因、基因檢測等快速檢測與篩選。
特點與優勢:
實驗例:(提取各種材料DNA,并應用各自特異引物進行PCR擴增結果)
1、應用植物材料:
取10mg玉米、大豆、水稻的葉片和種子材料分別進行DNA提取擴增實驗,圖片為以快速DNA提取擴增套裝提取的DNA為模板分別用玉米(zein基因)、大豆(lectin基因)、水稻(第12條染色體的694bp片段)的相應特異引物進行PCR實驗后,5ul PCR產物的瓊脂糖電泳結果,并用離心柱型植物基因組試劑盒提取DNA的擴增結果做陽性對照;
M:marker
1:葉片材料
2:種子材料
P:陽性對照
2、應用動物材料:
取10mg大鼠鼠尾進行DNA提取與PCR擴增實驗,并做2個實驗重復,用大鼠β-Actin引物進行PCR實驗后,5ul PCR產物的瓊脂糖電泳結果,并用離心柱型動物組織基因組試劑盒提取DNA做擴增陽性對照;
M:marker
P:陽性對照
3、應用細菌材料:
取200ul培養金黃葡萄球菌和大腸桿菌材料分別進行DNA提取和PCR擴增實驗,每個材料均做4個實驗重復,用16s rDNA引物進行PCR實驗后,5ul PCR產物的瓊脂糖電泳結果,并用以無菌水做擴增陰性對照;
M:marker
positive:金黃葡萄球菌
negative:大腸桿菌
NTC:陰性對照
當前,基因組DNA提取大都采用傳統的CTAB+酚氯仿方法(植物樣本常用方法)或SDS+酚氯仿方法(動物樣本常用方法)等提取方法,傳統的酚氯仿抽提方法有著操作步驟繁瑣、操作復雜及耗時較長、使用的酚氯仿等有機溶劑有著污染環境和危害實驗人員健康甚至具有高度的致癌風險,另外,傳統提取方法所提取出來的DNA常含有較多的蛋白殘留、多糖的污染、酚類物質的污染(如DNA為褐色)是提取基因組DNA 時常遇到的非常棘手的問題,而蛋白、多糖和酚類等雜質對后續的酶切、PCR反應等下游實驗有較強的抑制作用。快速DNA提取擴增套裝提供的方法制備基因組DNA快速簡便,大大縮短了抽提基因組DNA時間,而且研究表明各種,本方法從植物葉片,種子,細菌,到動物組織各種材料提取基因組DNA后續PCR效果和重復性均較好,同時,方法所需要材料量僅10mg,特別適合于高通量的篩選如轉基因、基因檢測等快速檢測與篩選,大大縮短檢測時間,提速檢測進程。