CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）

創新點：從少數細胞（數個～200個左右）起始，不需要進行RNA和cDNA的精制，即可直接進行高效率的cDNA擴增或對幾個基因進行Real Time PCR解析。

特點：

從少數細胞（數個～200個左右）起始即可直接進行高效率的cDNA擴增。

從少數細胞起始即可對幾個基因進行Real Time PCR解析。

操作簡便，不需要進行RNA和cDNA的精制。

可以對微量的RNA進行cDNA擴增。

對于細胞數量非常有限的樣品來說，定量RT-PCR是研究其中基因表達模式的常用方法。然而，由于樣品量少或者非常珍貴，在純化過程中的樣品損失和產率的影響尤為關鍵，因此少量細胞的RNA的分離純化成為令人困擾的問題。

TaKaRa的CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）是從少數細胞直接反轉錄合成cDNA，然后對反轉錄的cDNA進行擴增的試劑盒。擴增的cDNA可以作為Real Time PCR的模板使用。通常情況下，進行微量核酸提取時，純化過程中核酸會有所損失，使用本制品不需要對細胞RNA和反轉錄的cDNA進行純化，即可對反轉錄的cDNA高效擴增。

使用CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time），首先溶解細胞，然后使用dT Adaptor Primer（RT dT Primer）進行反轉錄反應，由mRNA合成cDNA，通過TdT酶對合成的cDNA進行dA加尾反應后，以此作為模板進行PCR反應擴增cDNA。

操作簡便，不需要進行RNA和cDNA的精制。從少數細胞起始即可對幾個基因進行Real Time PCR解析，一次反應得到的cDNA可以進行2,000次以上的Real Time PCR解析。

操作流程如下：

CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）除了能從極少數細胞直接進行cDNA擴增外，也可以對微量的RNA進行cDNA擴增。

實驗例：按照CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）的操作方法，分別使用小鼠細胞（2、20、200個）以及小鼠Total RNA（20 pg、200 pg、2000 pg）作為起始材料進行cDNA擴增，將擴增得到的cDNA 10倍稀釋后，取2 ml作為Real Time PCR的模板，進行Real Time PCR反應，檢定Mouse Rplp1基因。Real Time PCR反應使用了SYBR^® Premix Ex Taq^TMⅡ（Perfect Real Time）（TaKaRa Code：DRR081）試劑盒；Real Time PCR儀使用了Thermal Cycler Dice^® Real Time System（TaKaRa Code：TP800）。

起始材料：小鼠細胞

起始材料：小鼠肝臟來源的Total RNA

上圖為使用Real Time PCR進行Mouse Rplp1基因的檢出結果。分結果顯示，使用CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）能夠進行高效率的cDNA合成和擴增，使用少量的細胞或Total RNA進行cDNA的合成和擴增后便可以有效地進行Real Time PCR反應。