俗話說，巧婦難為無米之炊，蛋白質的結構與功能研究當然也離不開大量的高純蛋白。要想獲得大量蛋白，嬌貴的哺乳動物細胞可很難做到，主要依靠大腸桿菌表達系統，操作簡單，價格便宜量又足。然而，大腸桿菌中生產的外源蛋白量是不少，卻常常形成包涵體，讓人歡喜讓人憂。雖說包涵體也有不少優點，諸如易純化、耐蛋白水解等，但要想摸索出合適的條件，讓包涵體重折疊成天然的構象，自然少不了一番周折。如果能同時篩選多個重折疊條件，那將會節省不少時間，且增加成功的幾率，起到事半功倍的效果。

默克旗下Novagen就開創性地推出了這樣的系統——iFOLD 蛋白重折疊三兄弟。這三兄弟各帶有一塊96孔板，上面分別有92（老大）、94（老二）和91（老三）種獨特的緩沖液。這些緩沖液成分是根據REFOLD數據庫（http://refold.med.monash.edu.au）和眾多成功重折疊的文獻而確定的，內含特定pH值、鹽、環式糊精、氧化還原試劑以及重折疊添加劑的不同組合。

iFOLD三兄弟中的老幺是在去年底上市的，它的獨特之處是采用全新的化學試劑—FoldACE—作為主要的復性添加劑。這個FoldACE試劑是什么來頭？有什么好處呢？它是從一個能增加蛋白回收率的化學試劑庫中篩選出來的。FoldACE試劑共有五種，每一種都是水溶性的有機鹽，分子量小于500 Da。它們不是去污劑，也不會形成膠束。在蛋白復性之后，FoldACE試劑可以通過金屬螯合親和層析或分子篩的方法有效去除，透析或超濾也可以。實驗表明，它們能顯著增強某些蛋白的折疊效率。

除了FoldACE試劑，iFOLD 3系統復性緩沖液的pH緩沖液成分也是五選一，分別是Bis-Tris、MOPS、HEPES、EPPS和TAPS。孔中還包含了還原劑（TCEP）或谷胱甘肽氧化還原緩沖液。iFOLD 3能根據不同的緩沖液、pH值、氧化還原劑和FoldACE試劑的組合，篩選一個蛋白的91種復性條件（91個實驗孔和5個對照孔）。

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篩選流程如下：
起始物質：包含目標蛋白的細胞 → 收集細胞 → 超聲裂解細胞，并加入Lysonase生物處理試劑 → 離心收集包涵體 → 用Triton X-100洗滌包涵體 → 用鹽酸胍變性包涵體 → 用iFOLD 3平板快速復性目標蛋白 → 用D-Tube96 透析器透析緩沖液 → 分析復性蛋白

iFOLD 蛋白重折疊三兄弟的比較：

iFOLD系統的特征包括：

• 覆蓋近300個重折疊條件
  
• 包括純化包涵體的所有試劑
  
• 含有96孔板重折疊緩沖液矩陣
  
• 測試pH范圍在7.0-9.0之間
  
• 重折疊添加劑包括鹽、環式糊精、氧化還原劑、；離液鹽、NDSB和獨特的FoldACE試劑
  
• 重折疊條件基于眾多文獻和REFOLD數據庫
  

有了iFOLD重折疊三兄弟的幫助，相信枯燥冗長的實驗摸索可以很快完成，并讓你迅速走上蛋白結構與功能研究的光明大道。（生物通 余亮）

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