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遠離EB和紫外,檢測核酸有沒有更好的選擇?[新品推薦]
【字體: 大 中 小 】 時間:2009年10月13日 來源:生物通
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UltraPowerTM采用的是可見光光源,如果配合新一代核酸染料UltraPowerTM或者其他花菁類熒光染料,可檢測出幾十pg的dsDNA,靈敏度比紫外凝膠透射儀配合EB染料高10-25倍……
話說無論是初接觸分子生物學的新手,還是久經考驗的“老鳥”,都知道EB染料的有害性,這種有害性表現在三個方面:接觸致癌性,紫外觀測的誘變性,以及麻煩的后處理。但是要說到EB的替代品,好像又都不是那么合心意,比如SYBR類染料在紫外下不穩定,容易降解,一些像是GelRed之類的染料雖然毒性低,但是價格卻不親民——核酸染色成像這樣的活,哪個分子生物學實驗室不是每天3,4次啊。
想要避免EB的影響,又不想影響實驗的效果,許多實驗人員常陷入兩難中,另一方面,經典的凝膠成像系統一般都是采用的紫外成像,在這種波長下,EB的靈敏度和價格都是比較合適的,而其它的染料又存在不穩定性這一瓶頸式缺點,所以導致了雖然知道EB的有害性,但許多實驗室還是采用EB染料的現狀。
國內生物技術自主研發著名企業:百泰克公司2009年推出了新一代的凝膠透射儀,可用于核酸和蛋白質電泳凝膠樣品的觀察、處理、分析和拍照。
這種凝膠透射儀:UltraPowerTM采用的是可見光光源,如果配合新一代核酸染料UltraPowerTM或者其他花菁類熒光染料,可檢測出幾十pg的dsDNA,靈敏度比紫外凝膠透射儀配合EB染料高10-25倍。
這是由于花菁染料具有摩爾吸收系數大和熒光量子產率高的優點,通過共軛鏈長度的調節,花菁的光譜可以從可見光區一直延伸到近紅外區,采用紅區測量可有效地排除背景干擾,獲得更為理想的分析靈敏度和選擇性。花菁染料的光譜對外界微環境的變化極為敏感,非常適合生物及環境樣品的分析研究。
除此之外,UltraPowerTM可見光凝膠透射儀還可以用于多數熒光染料,比如SYBR Green I、綠色熒光蛋白(EGPF)等(具體染料見附表)。這可以算得上是一套多色熒光成像分析系統,而且UltraPower可以采用普通數碼相機拍照,從而擺脫了高昂造價得黑白CCD時代,可以拍出多姿多彩的電泳圖片來。
UltraPowerTM可見光凝膠透射儀具體特點見下:
1. 可見光激發 避免傳統紫外激發時有可能對核酸樣品造成的誘變和損傷,以至于克隆效率低下,甚至表達蛋白錯誤;
2. 實驗操作安全 在非紫外的可見光下操作,實驗操作人員更安全,真正杜絕了紫外對人皮膚的傷害;
3. 切膠方便,不用暗箱 配備本公司自主研發的特質觀察鏡,既可清晰地分辨電泳條帶,又能徹底擺脫傳統切膠回收時空間狹小,操作不便的弊端(圖1);
4. 數碼相機拍照,多彩亮麗 拍照更簡便,效果更清晰;從此告別高昂造價的黑白CCD時代,普通數碼相機就可拍出多姿多彩的電泳圖片來(圖2);
5. 靈敏度更高 和傳統紫外激發的EB染色相比,該產品和配套染料的靈敏度要高出8-20倍,能檢測低至0.1ul的DL2000(相當于100pg)(圖3、4、5)。



附表:
常用熒光染料波長及與UltraPowerTM可見光凝膠透射儀的適用性
|
名稱 |
激發/發射波長 |
適用性 |
|
SYBR Green I |
498/522 |
好 |
|
SYBR Gold |
495/540 |
好 |
|
SYPRO Orange |
475/580 |
好 |
|
SYPRO Red |
545/635 |
中 |
|
黃色熒光蛋白(EYFP) |
515/530 |
好 |
|
綠色熒光蛋白(EYFP) |
490/510 |
好 |
|
伊紅(Eosin) |
525/546 |
中 |
|
熒光素(Fluorescein) |
495/525 |
好 |
|
GelStar |
495/530 |
好 |
|
熒光黃(Lucifer yellow) |
428/544 |
好 |
|
光神霉素(Mithramycin) |
457/570 |
好 |
|
NBD |
476/538 |
好 |
|
Pyronin Y |
488/580 |
好 |
|
Rhodamine 123 |
560/620 |
中 |
|
|
|
|