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        SOLiD實現單細胞基因表達圖譜分析 推進干細胞研究[創新技巧]

        【字體: 時間:2008年10月07日 來源:生物通

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          康涅狄格州法明頓 -2008.9.17.美國應用生物系統公司(ABI)的科學家們在康涅狄格干細胞研討會(Connecticut Stem Cell Technology Symposium)上提交與劍橋大學科學合作所獲得的數據,展示該公司的超高通量基因組分析平臺-SOLiD系統如何在單細胞水平上獲得基因組范圍的表達圖譜數據。單細胞水平的基因表達特征有可能揭示關乎細胞命運的細節,并可能加速疾病相關的生物標記物的發現。這個結果是第一次利用基因組分析平臺在單細胞中進行全基因組范圍的基因表達縱覽。ABI供稿 生物通翻譯

            今天,美國應用生物系統公司(ABI)的首席科學家- Kai Lao博士將在他的報告:“單個胚胎干細胞和早期胚胎的全miRNA/mRNA圖譜分析”中展示這些數據。Lao博士將陳述他和他的合作者----劍橋大學生理和生殖方面的Azim Surani博士、Mary Marshall和Arthur Walton教授,如何利用SOLiD系統來確定小鼠卵母細胞在早期分化時的mRNA(信使RNA)表達圖譜。從單個干細胞中獲得基因活性的綜合圖譜有望揭示遺傳上相似的單個干細胞之間分子變異的線索,從而揭示引發多能干細胞分化成特定細胞類型包括癌細胞的潛在分子機理。這些干細胞行為的詳細特征將有助于研究人員更好地了解如何利用這些細胞該用于受損細胞或器官的再生治療。

            Surani博士表示:“盡管所有胚胎干細胞都具有天生的自我更新能力,但最近的科學數據顯示這些未分化的胚胎干細胞其實是不同的,所表達的基因標記各不相同。SOLiD系統產生的基因表達圖譜分析將以單細胞的分辨率產生精確的干細胞全基因組圖譜,包括已知的轉錄本和新基因,它將使我們加深對調節(干細胞)多能性和早期分化的生物機理的了解。”

            在這項研究中,科學家們首先從小鼠卵母細胞中分離單個胚胎細胞,并利用Ambion(ABI旗下品牌)的RNA分離試劑盒提取出總RNA。這些痕量的總RNA然后反轉錄形成cDNA。擴增所獲得的文庫,并用SOLiD系統進行測序。mRNA的相對表達水平通過系統產生的序列標簽數目來計算。SOLiD系統每次運行能產生高達2億4千萬個標簽,檢測靈敏度可檢測到每個細胞中10-40pg的總RNA,即使mRNA表達水平很低,SOLiD系統也能夠通過分析樣品中存在的已知和未知mRNA,從而定量特定mRNA的差異表達模式。為了驗證特定mRNA分子的存在,研究人員隨即用高特異性的TaqMan® Gene Expression Assays來定量樣品中mRNA的含量。

            過去的研究表明通過分析基因和非編碼RNA的表達圖譜,研究人員可以對不同細胞或組織類型的轉錄本獲得更準確的認識,這將有助于加速發掘潛在的生物標志物,從而對區分不同的疾病類型以及識別疾病易感性。這些信息將有助于研究人員更好地了解病變細胞的特性,如在癌癥復發和腫瘤轉移中扮演重要角色的癌癥干細胞。然而,在干細胞和癌癥研究中進行這類基因表達分析的研究人員常常面臨這樣的挑戰:作為進行研究的必要起始物質,從生物樣品中獲得的RNA量極少。SOLiD系統的高靈敏度使研究人員能夠從單個細胞和癌癥樣品中存在的痕量RNA中產生詳細的基因表達圖譜。

            目前應用最廣泛的從全局角度分析基因表達整體模式的方法是DNA微陣列。然而,微陣列技術的靈敏度有限,需要更多的樣品量,并且無法檢測新的mRNA。相反,SOLiD系統檢測表達基因的DNA序列標簽時所需的起始遺傳物質比微陣列技術要少得多。因為微陣列是基于雜交的技術,無法有效檢測低水平表達的RNA轉錄本,也不能用于檢測重復序列的RNA轉錄本。另外,微陣列的動力范圍有限,無法捕捉到目的基因表達水平的微小變化,而這恰恰是研究在刺激下或環境變化時的生物反應所必需的。由于可以進行整體的全基因組表達圖譜分析,使用SOLiD系統的研究人員可檢測到單細胞中廣為人知的或者新的mRNA,不會像基于探針的微陣列技術那樣偏向已知RNA分子。

            ABI公司分子和細胞生物學基因組分析部的負責人- Shaf Yousaf認為:“能夠在單細胞水平上評估基因活性的能力,開始讓研究人員考慮更深入的實驗,從而使我們更深入了解復雜疾病如癌癥的生物基礎。由于我們對干細胞行為有了更深入的了解,我們將更深入地研究這些自我更新細胞如何導致疾病發生。”

            SOLiD系統的應用驗證了ABI公司以超高通量基因組平臺加速轉錄本分析的承諾。除了單細胞基因表達圖譜分析,SOLiD系統在RNA方面的其他應用還包括利用SOLiD Small RNA Expression Kit來發現和篩選小分子RNA,以及利用SOLiD Whole Transcriptome Kit來探索和鑒定全轉錄本。這一系列應用補充使研究人員能在單個超高通量平臺上開展綜合的RNA研究。

            康涅狄格干細胞研討會今天在康涅狄格州法明頓的法明頓萬豪酒店舉行,時間是從上午8點到下午5點。日程包括康涅狄格大學、耶魯大學、衛斯理大學和當地制藥/生物技術公司的主要干細胞研究人員的科學報告和海報張貼部分。

            新澤西干細胞研討會將于9月18日-19日在橋水市的萬豪酒店舉行,時間也是從上午8點到下午5點。日程包括羅格斯大學、新澤西醫科和牙科大學、普林斯頓大學、制藥及生物技術公司的主要干細胞研究人員的科學報告和張貼海報部分。

        更多關于康涅狄格和新澤西干細胞研討會的信息,請訪問<http://info.appliedbiosystems.com/cscts2008_>和<http://info.appliedbiosystems.com/njscts2008_>。
         
        關于SOLiD系統

            SOLiD系統是一個端到端的新一代基因組分析解決研究方案,包含測序組件、化學組件、計算集群和數據存儲組件。這個平臺基于通過寡核苷酸連接和檢測來進行測序。與聚合酶測序方法不同的是,SOLiD系統利用專利的逐步連接技術來產生高質量的數據,可應用于全基因組測序和定向重測序、轉錄本分析、小分子RNA發現、基因表達圖譜分析、染色質免疫沉淀(ChIP),微生物和真核重測序、數字核型分析、醫學測序、基因分型及其他。

            無可比擬的超高通量、內在的可擴展性以及無可匹敵的精確性使SOLiD系統從新一代測序平臺中脫穎而出。這個系統可以通過微珠富集從而進行擴展,以支持每塊玻片上更高密度的測序。微珠是SOLiD系統開放式玻片格式的內在組成部分,它使系統每一次運行能產生高達6GB的序列數據。SOLiD系統已經在客戶實驗室證實了每次運行可產生高達150億個可定位的測序數據,在ABI研發部門內更可達到每輪運行產生超過200億個堿基的可定位的測序數據。開放式玻片格式、微珠富集和軟件算法的整合,使得SOLiD系統可擴展至更高通量,而這種擴展無需對現有的平臺的硬件或軟件做很大的改變。SOLiD系統獨特的雙堿基編碼提供了內在的錯誤校驗能力,將真正的單堿基突變或單核苷酸多態性與隨機或系統錯誤區分開來。這個性能讓研究人員檢測SNP的準確性超過了99.94%。
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        關于美國應用生物系統公司
            美國應用生物系統公司(ABI)是為生命科學研究、工業和商業市場開發和銷售儀器系統、耗材、軟件及服務的全球領先者。在堅信科學的力量能改善人類環境的信念驅動下,該公司推出了DNA、RNA、蛋白和小分子分析的創新技術的商業化方案。各個學科的客戶如學術、臨床研究、制藥研究和生產、法醫DNA分析和農業生物技術的客戶,利用該公司的工具和服務以加速科學探索的進程,改善藥物研發的過程,檢測可能致病的微生物,通過DNA信息識別個人。ABI有著一個綜合的服務和應用領域支持團隊以支持全球范圍的高品質遺傳及蛋白分析解決方案的安裝實施。ABI公司總部設在美國康涅狄格州的Norwalk。在2008年6月12日,Applera公司與Invitrogen公司宣布它們的董事會已經批準了合并協議,根據此項協議,Invitrogen將收購ABI的所有已發行股票。這次合并受慣例成交條件的約束,預計在2008年秋季完成。更多關于這次合并的信息在聯合代理人聲明中提供,并郵寄給該公司和Invitrogen的股東。投資者和證券持有人都急于看到這份文件,因為它包含了重要的信息。更多關于ABI公司的信息,包括提交給證券交易委員會的報告和其他信息,請登錄<http://www.appliedbiosystems.com_>查看。這篇新聞中的所有信息都截至發布之日,除非法律要求,ABI公司不承擔更新信息的義務。

         

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